结核杆菌Ag85B的基因克隆及在大肠杆菌中的表达

目的：通过结核杆菌Ag85B基因的克隆和在大肠杆菌表达的研究，探讨Ag85B蛋白作为候选疫苗用于结核免疫预防和治疗的可行性。方法：用PCR技术，扩增人结核杆菌Edman株Ag85B基因序列，并将扩增的DNA片段插入克隆质粒载体pUC18，用质粒酶谱和DNA充阢分析鉴定重组克隆。克隆的Ag85B基因插入原核表达质粒pBV220，构建重组Ag85B表达质粒，用SDS－PAGE和Western blot鉴定大肠杆菌表达的重组蛋白。结果：成功克隆了结核杆菌Ag85B基因，构建了Ag85B的原核表达载体，获得了高效表达菌株，目的蛋白的表达量达菌总蛋白的25％－30％。结论：获得了高效表达人结核杆菌Ag85B成熟蛋白的工程菌株，为Ag85B保护性抗原位点分析和新型结核疫苗的研制奠定了基础。