| 重组趋化因子vMIP-Ⅱ在大肠杆菌中的表达和纯化 |
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| 引用本文： | 苏青和,郑红.重组趋化因子vMIP-Ⅱ在大肠杆菌中的表达和纯化[J].生物医学工程与临床,2003,7(4):222-225. |
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| 作者姓名： | 苏青和 郑红 |
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| 作者单位： | 1. 无锡市第三人民医院烧伤科实验室,江苏,无锡,214041
2. 第三军医大学西南医院实验中心,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的重组病毒巨噬细胞炎性蛋白-Ⅱ( viral macrophage inflammatory protein-Ⅱ,vMIP-Ⅱ)在大肠杆菌中表达及纯化.方法以pET32a(+)-vMIP-Ⅱ为重组趋化因子vMIP-Ⅱ克隆基因的表达质粒,以大肠杆菌BL21(DE3)pLysS为表达菌,在IPTG诱导下表达出一个由230个氨基酸残基组成的硫氧还蛋白(thioredoxin)-vMIP -Ⅱ的融合蛋白(26×103).经细菌裂解、金属离子螯合亲和层析、肠激酶消化以游离vMIP-Ⅱ及阳离子交换层析等步骤纯化目的蛋白,以配体结合实验鉴定纯化产物的生物学活性.结果从1 L 发酵菌液中可获得高纯度目的蛋白约4～6 mg.配体结合实验表明,该产物能与CCR5结合Kd=(10.90±1.07) nmol/L].结论采用本方法可获得高表达、高纯度的具有生物学活性的重组病毒趋化因子vMIP-Ⅱ.
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| 关 键 词： | 趋化因子 重组蛋白 大肠杆菌 表达 纯化 |
| 文章编号： | 1009-7090(2003)04-0222-04 |
| 修稿时间： | 2003年7月21日 |
Expression and Purification of Recombinant Chemokine vMIP-Ⅱ in E.coli |
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