| 弓形虫SAG1-MIC3融合基因真核表达载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 田小东,古钦民,周怀瑜,张加勤,丛华,赵群力,李瑛. 弓形虫SAG1-MIC3融合基因真核表达载体的构建与鉴定[J]. 中国病原生物学杂志, 2008, 3(3): 190-194 |
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| 作者姓名： | 田小东 古钦民 周怀瑜 张加勤 丛华 赵群力 李瑛 |
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| 作者单位： | 山东大学医学院寄生虫学教研室,山东济南,250012 |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金 , 山东省科技发展基金 |
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| 摘 要： | 目的构建编码弓形虫RH株膜表面蛋白1（SAG1）和微线体蛋白3（MIC3）的重组真核表达载体pcDNA3．1-SAG1-MIC3并鉴定，为弓形虫疫苗研制作准备。方法采用PCR技术从弓形虫基因组DNA中分别扩增SAGl和MIC3基因片段。分别克隆人pMD18T载体，并对重组人外源基因的质粒通过PCR、酶切和测序鉴定；采用亚克隆技术将SAG1和MIC3基因克隆至真核表达载体pcDNA3．1（-），经含氨苄青霉素的LB平板筛选阳性重组质粒pcDNA3．1-SAG1-MIC3，PCR、酶切和测序鉴定；采用脂质体法将重组载体转染Hela细胞，经RT—PCR法检测转染细胞转录情况。结果MIC3和SAG1基因的TA-cloning经PCR和酶切鉴定，大小分别为933bp和789bp，与预期值一致；pcNDA3．1-SAG1-MIC3经酶切鉴定，目的片段约为1722bp．与SAG1MIC3长度相当；测定重组载体的核苷酸序列。与GenBank中的相应序列100％同源；PCR验证载体携带的SAG1-MIC3融合基因在Hela细胞中转录生成mRNA。结论成功构建重组真核表达载体pcDNA3．1SAG1-MIC3．为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。
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| 关 键 词： | 刚地弓形虫 MIC3 SAG1 疫苗 构建 表达 弓形虫 融合基因真核表达载体 构建与鉴定 Toxoplasma gondii containing recombinant plasmid identification 核酸疫苗 mRNA 细胞转录 验证 GenBank 序列 核苷酸 测定 长度 预期值 大小 酶切鉴定 结果 |
| 文章编号： | 1673-5234(2008)03-0190-04 |
| 修稿时间： | 2007-11-18 |
Construction and identification of recombinant plasmid containing SAG1 and MIC3 from Toxoplasma gondii |
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| TIAN Xiao-dong,GU Qin-min,ZHOU Huai-yu,ZHANG Jia-qin,CONG Hua,ZHAO Qun-li,LI Ying. Construction and identification of recombinant plasmid containing SAG1 and MIC3 from Toxoplasma gondii[J]. Journal of Pathogen Biology, 2008, 3(3): 190-194 |
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| Authors: | TIAN Xiao-dong GU Qin-min ZHOU Huai-yu ZHANG Jia-qin CONG Hua ZHAO Qun-li LI Ying |
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