CTLA4.FasL双功能融合基因真核表达载体的构建与表达 |
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作者姓名: | 万真 吕毅 严小鹏 张晓刚 |
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作者单位: | 万真 (西安交通大学第一附属医院肝胆外科,陕西西安,710061) ; 吕毅 (西安交通大学第一附属医院肝胆外科,陕西西安,710061) ; 严小鹏 (西安交通大学第一附属医院肝胆外科,陕西西安,710061) ; 张晓刚 (西安交通大学第一附属医院肝胆外科,陕西西安,710061) ; |
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摘 要: | 目的:构建携带CTLA4.FasL双功能融合基因的真核表达质粒,并在HEK293细胞中表达。方法:PCR扩增得到CTLA4和FasL胞外区编码序列,后用重叠PCR的方法将该两段序列融合,且在两者间插入接头序列(编码一柔性短肽GGSGG),所得的基因片段命名为CTLA4.FasL。XhoⅠ/KpnⅠ双酶切后,定向克隆至质粒pcDNA3.1(-),构建成真核表达载体pcDNA3.1(-)-CTLA4.FasL。转染入HEK293细胞,RT-PCR和Western blot验证融合基因的表达。结果:重叠PCR扩增获得CTLA4.FasL融合基因。真核表达载体pcD-NA3.1(-)-CTLA4.FasL成功构建,并在HEK293细胞表达。结论:成功构建了携带双功能融合基因的真核表达载体,为利用CTLA4.FasL基因修饰肝干细胞用于同种细胞移植治疗奠定了基础。
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关 键 词: | 肝干细胞移植 基因治疗 融合蛋白 |
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