| 携带人Oct4和EGFP基因慢病毒表达载体构建 |
| |
| 引用本文： | 肖高芳,姚志芳,贾俊双,李艳青,鄢文,肖东,姚开泰. 携带人Oct4和EGFP基因慢病毒表达载体构建[J]. 热带医学杂志, 2010, 10(3) |
| |
| 作者姓名： | 肖高芳 姚志芳 贾俊双 李艳青 鄢文 肖东 姚开泰 |
| |
| 作者单位： | 1. 南方医科大学肿瘤研究所,广州,510515
2. 南方医科大学肿瘤研究所,广州,510515;南方医科大学比较医学研究所暨实验动物中心,广州,510515 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金委员会-广东省联合基金重点项目，国家自然科学基金，广东省自然科学基金，广东省卫生厅资助项目，南方医科大学优秀中青年科技人才库科研资助金，广州地区科学仪器协作共用网专用基金 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建携带人Oct4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUOGW.方法 Sac Ⅱ线性化pLentiEF1a-Oct4-IRES-EGFP,回收片段并补平Sac Ⅱ切口,接着BamH Ⅰ酶切该片段,回收2.565 kb片段而获连接用Oct4-IRES-EGFP;EcoR Ⅰ线性化pFUGW,回收并补平EcoR Ⅰ切口,然后BamH Ⅰ酶切该片段,回收9.174 kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的Solution Ⅰ将其与连接用Oct4-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定.所构建载体命名为pFUOGW.获pFUOGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带Oct4和EGFP基因的慢病毒感染293FF细胞和鼻咽癌细胞株C666-1、CNEI和6-10B以建立相应病毒感染体系.结果 酶切鉴定证实成功构建了pFUOGW,按标准程序生产的携带Oct4和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和6-10B.结论 成功构建携带人Oct4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUOGW,为相关后续的研究打下良好的基础.
|
| 关 键 词： | 慢病毒载体 |
Construction of A Lentiviral Expression Vector Harboring Human Oct4 and EGFP Genes |
| |
| XIAO Gao-fang,YAO Zhi-fang,JIA Jun-shuang,LI Yan-qing,YAN Wen,XIAO Dong,YAO Kai-tai. Construction of A Lentiviral Expression Vector Harboring Human Oct4 and EGFP Genes[J]. Journal Of Tropical Medicine, 2010, 10(3) |
| |
| Authors: | XIAO Gao-fang YAO Zhi-fang JIA Jun-shuang LI Yan-qing YAN Wen XIAO Dong YAO Kai-tai |
| |
| Affiliation: | XIAO Gao-fang1,YAO Zhi-fang1,JIA Jun-shuang1,LI Yan-qing1,YAN Wen1,XIAO Dong1,2,YAO Kai-tai1(1.Cancer Research Institute,Southern Medical University,Guangzhou 510515,2.Institute of Comparative Medicine , Center of Experimental Animals,China) |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Oct4 EGFP |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
