人泛素偶联酶UBE2C／UbeH10基因的克隆、原核表达载体的构建及表达

目的获取泛素偶联酶家族成员之一的UBE2C／UbcH10的基因，构建具有His标签的原核表达载体，在大肠杆菌中表达UBE2C／UbcH10蛋白。方法利用RT—PCR的方法从肝癌细胞HepG2中获得UbcH10的基因，克隆到pMD-19T载体中并测序鉴定，酶切回收后插入原核表达载体pET32a（＋）中，构建重组表达载体pET32a—UbcH10，转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导表达。结果重组表达载体pET32a—UbcH10在大肠杆菌BL21中经IFFG诱导4h获得稳定高效的融合表达。重组蛋白以可溶形式存在，大小在29．0kD左右。结论UbcH10重组表达载体的成功构建以及重组蛋白的表达，为进一步其结构和功能的研究奠定了基础，有望揭示该蛋白在癌症发生发展过程中的作用。