| 大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建 |
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| 引用本文： | 张树威,陈安民,郭风劲,胡伟华,李明辉,廖晖,祝文涛,宋登新.大鼠骨骺干细胞的分离鉴定及其永生化细胞株的构建[J].中国矫形外科杂志,2007,15(16):1245-1248. |
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| 作者姓名： | 张树威 陈安民 郭风劲 胡伟华 李明辉 廖晖 祝文涛 宋登新 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科,武汉,430030 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;高等学校博士学科点专项科研项目 |
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| 摘 要： | 目的]分离、鉴定大鼠骨骺干细胞并建立永生化的大鼠骨骺干细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源.方法]采用Percoll不连续密度梯度离心法分离骨骺干细胞,利用电穿孔转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因（SV40Tag）的质粒pCMVSV40T/PUR转染骨骺干细胞,经嘌呤霉素筛选,抗性克隆扩大培养.应用FGFR-3抗体和PCNA抗体进行免疫细胞化学染色,观察细胞的形态及其生长状况并绘制细胞生长曲线.用免疫细胞化学法和RT-PCR检测SV40Tag在转染细胞中的表达.结果]转染后获得一个阳性细胞克隆,免疫细胞化学结果显示FGFR-3抗体染色阳性.SV40Tag抗体染色和RT-PCR结果显示SV40Tag已稳定转染入骨骺干细胞.转染细胞经扩大培养,命名为永生化骨骺干细胞.结论]成功纯化大鼠骨骺干细胞并构建了SV40Tag永生化的骨骺干细胞株.
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| 关 键 词： | 骨骺干细胞 永生化 猿肾病毒.40 |
| 文章编号： | 1005-8478（2007）16-1245-04 |
| 收稿时间： | 2007-05-08 |
| 修稿时间： | 2007年5月8日 |
Identification of rat precartilaginous stem cells and constuction of the immortalized cell strain |
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| ZHANG Shu-wei,CHEN An-min,GUO Feng-jin.Identification of rat precartilaginous stem cells and constuction of the immortalized cell strain[J].The Orthopedic Journal of China,2007,15(16):1245-1248. |
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| Authors: | ZHANG Shu-wei CHEN An-min GUO Feng-jin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | precartilaginous stem cells immortalization simian virus 40 |
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