水通道蛋白4基因沉默与体外培养星形胶质细胞的形态生长及其增殖效应 |
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引用本文: | 楚燕飞,李兵仓,陈菁,王建民.水通道蛋白4基因沉默与体外培养星形胶质细胞的形态生长及其增殖效应[J].中国临床康复,2006,10(17):88-91,i0006. |
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作者姓名: | 楚燕飞 李兵仓 陈菁 王建民 |
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作者单位: | [1]解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所6室,重庆市400042 [2]解放军第一五0医院脑外科,河南省洛阳市471031 |
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基金项目: | 军队“十五”指令性课题(01L060) |
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摘 要: | 目的:研究短发夹环质粒载体对体外培养的星形胶质细胞水通道蛋白4表达的基因沉默效果。
方法:实验于2003-12/2005-05在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成。实验动物为SPF级Wistar新生3d大鼠20只,进行大鼠星形胶质细胞分离、培养。实验使用传至第三代的星形胶质细胞。构建特异性抑制水通道蛋白4表达的短发夹环质粒载体水通道蛋白4RNAi pGenesil-2,将体外培养的星形胶质细胞分为水通道蛋白4基因沉默组、水通道蛋白4基因沉默对照组、脂质体组和正常对照组,运用脂质体法转染质粒载体,分别于转染后2,3,5,7d通过观察细胞形态和数量的改变,应用反转录-聚合酶连反应、免疫组织化学分别检测水通道蛋白4mRNA和蛋白的表达,水通透实验验证水通道蛋白4基因沉默后星形胶质细胞的水通透功能。
结果:星形胶质细胞水通道蛋白4基因沉默后,水通道蛋白4mRNA及蛋白的表达呈进行性减少,至第7天水通道蛋白4mRNA和蛋白表达水平分别减少了(80.12&;#177;1.01)%和(80.2&;#177;2.54)%,细胞数量减少约60%,星形胶质细胞从扁平和多角形变成类纤维形胶质细胞。水通透实验证实经水通道蛋白4基因沉默的星形胶质细胞体积增大的速度慢于正常星形胶质细胞。
结论:构建的水通道蛋白4基因沉默pGenesil-2质粒载体可抑制星形胶质细胞水通道蛋白4的表达;水通道蛋白4参与星形胶质细胞快速水转运过程;水通道蛋白4也对维持体外培养的星形胶质细胞形态、生长、增殖起重要作用。
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关 键 词: | 小神经胶质细胞 脑水肿 RNA干扰 水通道蛋白 |
文章编号: | 1671-5926(2006)17-0088-04 |
收稿时间: | 12 20 2005 12:00AM |
修稿时间: | 2005-12-202006-02-06 |
Aquaporin-4 gene silencing in the form, growth and proliferative effect of astrocytes cultured in vitro |
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Abstract: | |
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