敷和汤对特应性皮炎小鼠 Toll样受体 4/核因子 -κB通路调控辅助性 T细胞 1/辅助性 T细胞 2的作用及机制研究

目的基于 Toll样受体 4(TLR4)/核因子 -κB(NF-κB)信号通路探讨敷和汤对特应性皮炎( AD)小鼠模型的作用及辅助性 T细胞 1(Th1)/辅助性 T细胞 2(Th2)免疫平衡的机制。方法将 40只 BALB/c小鼠采用随机数字表法分为四组:对照组、模型组、地氯雷他定组、敷和汤组，每组 10只，除正常组外，其余各组均用 2，4-二硝基氟苯( DNFB)刺激。在 DNFB刺激后的第 14天各组给予相应药物治疗 14 d。治疗后观察各组小鼠皮损变化；记录 10 min内小鼠搔抓次数；测量胸腺、脾脏指数；苏木精 -伊红(HE)染色观察皮肤组织病理形态学改变；免疫组化检测 TLR4阳性蛋白；酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中免疫球蛋白 E(IgE)、白细胞介素 4(IL-4)、白细胞介素 6(IL-6)和瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平变化；实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测小鼠皮肤组织中核因子 -κB P65(NF-κB P65)、 TLR4、白细胞介素 2(IL-2)、白细胞介素 10(IL-10)、白细胞介素 1β(IL-1β)、干扰素 -γ(IFN-γ)的 mRNA水平变化。结果与正常组相比，模型组小鼠皮损严重、表皮明显增生、角化过度、大量炎性细胞浸润；小鼠搔抓次数( 12.80±1.32)次 /10分钟和皮损评分( 4.00±0.67)分、脾脏和胸腺指数分别为 42.53±2.04和 35.76±2.01，免疫组化检测 TLR4阳性蛋白为 97.20±12.19；血清 IgE、IL-4、IL-6和 TNF-α水平分别为( 302.39±46.60)μg/L、(239.54±29.23)ng/L、(249.94±33.62)ng/L、(310.01±50.09)ng/L，皮损 NF-κB P65、TLR4、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-1β的 mRNA表达分别为( 6.70±0.38、7.45±0.30、4.03±0.57、3.35±0.35、5.31±0.12、41.21±1.17)显著升高(均 P<0.05)；敷和汤组给药 14 d后小鼠搔抓次数( 4.30±0.67)次 /10分钟和皮损评分( 1.40±0.52)分、脾脏和胸腺指数分别为 29.11±1.61和 22.02±1.15，免疫组化检测 TLR4阳性蛋白为 70.85±7.76；血清 IgE、IL-4、IL-6和 TNF-α水平分别含量为( 183.89±11.74)μg/L、(112.67±9.233)ng/L、(121.88±10.84)ng/L、(153.24±12.78)ng/L，皮损 NF-κB P65、TLR4、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-1β的 mRNA表达分别为(2.87±0.15、2.23±0.31、2.57±0.46、2.39±0.19、2.35±0.21、23.27±2.44)低于模型组(均 P<0.05)；地氯雷他定组给药 14 d后小鼠搔抓次数( 5.30±0.67)次 /10分钟和皮损评分( 1.80±0.63)分、脾脏和胸腺指数分别为 27.23±1.19和 20.10±1.20，免疫组化检测 TLR4阳性蛋白为 77.28±5.77；血清IgE、IL-4、IL-6和 TNF-α水平含量分别为( 175.97±13.12)μg/L、(116.07±9.48)ng/L、(112.11±8.89)ng/L、(143.90±10.83) ng/L，皮损 NF-κB P65、TLR4、IL-2、IL-10、IFN-γ、IL-1β的 mRNA表达分别为( 2.53±0.08、3.46±0.28、2.03±0.11、1.52±0.22、2.15±0.19、23.52±1.24)低于敷和汤组(均 P<0.05)。结论敷和汤通过 NF-κB通路的激活抑制相关炎症因子反应以及调节 Th1/Th2发挥免疫稳定的作用，促进皮损修复，从而达到治疗的作用。

Effect and mechanism of Fuhe decoction on TLR4/NF-κB pathway regulating Th1/Th2 in atopic dermatitis mice