| 人TNFβ缺失体融合表达及其产物一步纯化法研究 |
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| 引用本文： | 徐建芬,周晴,马志章,余建法,华明,沈炳辉,丁仁瑞.人TNFβ缺失体融合表达及其产物一步纯化法研究[J].药物生物技术,2000,7(1). |
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| 作者姓名： | 徐建芬 周晴 马志章 余建法 华明 沈炳辉 丁仁瑞 |
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| 作者单位： | 1. 浙江大学生命科学学院,免疫工程实验室,杭州,310012
2. 浙江中医学院,杭州,310013
3. 美国希望之城癌症研究中心,91010-0269.USA 加利福利亚 |
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| 摘 要： | 本文将h TNFβN端缺失23aa的缺失体基因克隆于pET-28-C(+)表达载体,构建成T7lac启动子控制下His6-TNFβ融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达,His6-TNFβ表达量约占总菌体蛋白的25%,Mr 20500.表达产物大部分以包涵体形式存在.包涵体经过洗涤,70mol/L脲变性溶解,用Ni2+亲和层析一步快速纯化,所得His6-TNFβ的纯度达90%以上,回收率在90%左右.纯化产物稀释复性后,其细胞毒活性为(0.5～1.0)×106U/mg 蛋白左右.这些研究结果将为制备重组人TNFβ缺失体以及进一步研究其生物学功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 人β-肿瘤坏死因子 T7lac启动子 TNFβ融合表达 复性 pET-28表达 载体 Ni2+亲和层析 |
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