| 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定 |
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| 引用本文： | 段文元,张锡林,王英. 斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定[J]. 第三军医大学学报, 2004, 26(8): 720-723 |
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| 作者姓名： | 段文元 张锡林 王英 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部病原生物学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部病原生物学教研室,重庆,400038;第三军医大学基础医学部病原生物学教研室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽,对其免疫反应性作初步研究,在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础.方法用PCR法扩增目的基因片段,1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPoint T载体相连,并导入到大肠杆菌JM109菌株中去,诱导表达其编码的多肽片段.用裂解液制备抗原标本,经SDS-PAGE电泳后,经考马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况,Westernblotting鉴定其免疫反应性.结果转化实验共获得8株阳性重组子,经测序鉴定证实仅1株正向连接.经过诱导表达,制备重组抗原标本,经SDS-PAGE、转膜后生物素-链亲和素-碱性磷酸酶系统染色显示在32×103处有一融合蛋白条带,反向连接菌株与之相似,也出现一条表达带,但分子量远小于预期值,仅仅14×103左右.Western-blotting显示仅正向连接菌株在32×103的位置有一阳性染色条带.结论成功的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体,经过诱导后表达的重组抗原,具有良好的免疫反应性.
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| 关 键 词： | 斯氏狸殖吸虫 融合蛋白 半胱氨酸蛋白酶 |
| 文章编号： | 1000-5404(2004)08-0720-04 |
| 修稿时间： | 2003-05-29 |
Expression and identification of cysteine proteinase from adult worm of Pagumogonimus skrjabini in Escherichia coli |
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| DUAN Wen yuan,ZHANG Xi lin,WANG Ying. Expression and identification of cysteine proteinase from adult worm of Pagumogonimus skrjabini in Escherichia coli[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae, 2004, 26(8): 720-723 |
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| Authors: | DUAN Wen yuan ZHANG Xi lin WANG Ying |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pagumogonimus skrjabini cysteine protease fusion protein Western blotting immunoreactivity |
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