降血压肽对人脐静脉内皮细胞增殖及内皮素表达的影响

背景：降血压肽是一类能够降低人体血压的多肽，可通过抑制人体血管紧张素Ⅱ的生成而达到降低血压的作用。目的：在细胞分子水平探讨降血压肽对人脐静脉内皮细胞生长及内皮素表达的影响，为进一步将降血压肽开发为降压保健食品提供实验依据。设计：重复测量设计。单位：华南理工大学生命科学与工程学院，深圳职业技术学院应用生物技术系。材料：实验于2004-09／2005-03在深圳职业技术学院应用生物技术研究所完成。降血压肽由深圳职业技术学院应用生物技术研究所制备，在一定条件下抑制血管紧张素转移酶活性一半时所需要的抑制剂浓度为15μmol／L。传至4代的人脐静脉内皮细胞用于实验，随机分为7组：空白对照组、降血压肽150mg／L组、降血压肽300mg／L组、降血压肽600mg/L组、卡托普利阳性对照组、去甲肾上腺素阴性对照组、降血压肽＋去甲肾上腺素组。方法：①脐静脉内皮细胞按一般细胞培养方法进行，培养液为M199＋体积分数为0．15的小牛血清＋青霉素10000U／mL＋链霉素100mg／L。细胞长满致融合状态后，按1：2比例传代，传至第4代的细胞用于实验。②空白对照组含体积分数为0．15小牛血清的M199；降血压肽150，300，600ms／L组在此基础上加入降血压肽至终浓度分别为150，300，600mg／L；卡托普利阳性对照组在此基础上加入卡托普利至终浓度为10^-5mol／L；去甲肾上腺素阴性对照组在此基础上加入去甲肾上腺素终浓度为100μg／L；降血压肽＋去甲肾上腺素组在此基础上加入降血压肽至终浓度300mg／L，去甲肾上腺素至终浓度100μg／L。（3）采用细胞计数法测定各组细胞生长状况，放免法测定不同培养时间各组细胞培养液中内皮素含量，反转录聚合酶链式反应法测定内皮素mRNA的表达，免疫组化测定细胞内皮素蛋白的表达。’主要观察指标：①降血压肽对内皮细胞增殖、分泌内皮素的影响。②降血压肽对内皮细胞内皮素mRNA、内皮素蛋白表达的影响。结果：①降血压肽对内皮细胞增殖、分泌内皮素影响：随着培养时间的延长，与空白对照组比较，卡托普利阳性对照组及降血压肽各剂量组均有抑制内皮细胞生长、降低培养液中内皮素含量的作用（P〈0．01或0．05）；去甲肾上腺素可促进内皮细胞的生长和分泌内皮素，但加入降血压肽后细胞密度和内皮素含量均接近空白对照组（P〉0．05）。（函降血压肽对内皮细胞内皮素mRNA、内皮素蛋白表达的影响：与空白对照组比较，阳性对照卡托普利组及降血压肽各剂量组均可下调内皮素mBNA和内皮素蛋白的表达（P〈0.01或0．05）；去甲肾上腺素可上调内皮素mRNA和内皮素蛋白的表达，加入降血压肽后各基因表达接近空白对照组俨〉0．05）。结论：不同剂量的降血压肽对内皮细胞均有抑制生长作用，可降低细胞释放内皮素的含量，下调内皮素基因的表达，且能够有效对抗去甲肾上腺素的促脐静脉内皮细胞生长及分泌作用。

Influence of angiotensin-converting enzyme inhibitory peptide, on endothelial cell proliferation and endothelin expression in human umbilical vein cells