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| 生存素启动子调控HSV1-TK真核表达载体的构建及其对A549肺癌细胞系的杀伤作用 | |
| 引用本文： | 郁震,王炜煜,曹利民. 生存素启动子调控HSV1-TK真核表达载体的构建及其对A549肺癌细胞系的杀伤作用[J]. 江苏大学学报(医学版), 2010, 20(5) |
| 作者姓名： | 郁震 王炜煜 曹利民 |
| 作者单位： | 1. 无锡市人民医院呼吸科,江苏,无锡,214023 2. 华中科技大学附属同济医院普外科,湖北,武汉,430030 3. 中俄常州21世纪生物技术研究所,江苏,常州,213164 |
| 基金项目： | 科技部国际合作基金资助项目 |
| 摘 要： | 目的:构建生存素(survivin,SURV)启动子调控的单纯疱疹病毒1型胸苷激酶(HSV1-TK)基因表达载体,检测该启动子的活性和特异性,观察该基因对大鼠体内肺癌生长的抑制功能. 方法:酶切回收SURV启动子、CMV启动子;PCR扩增HSV1-TK基因;将上述片段与含有报告基因荧光素酶基因(Luciferase,Luc)的载体pGL3-Basic的多克隆位点连接,分别构建成为SURV、CMV启动子调控的HSV1-TK、Luc真核表达载体(pSURV-TK、pCMV-TK,pSURV-Luc、pCMV-Luc),用脂质体法将表达载体转染A549细胞系,蛋白质印迹法检测TK基因的表达,更昔洛韦细胞毒实验观察TK蛋白的酶活性,肿瘤生长抑制实验证实pSURV-TK的抑瘤功能. 结果:成功地将SURV基因启动子、CMV启动子,HSV1-TK克隆到报告基因载体pGL3 的多克隆位点,酶切鉴定和DNA 序列分析无误, 蛋白质印迹证实pSURV-TK在肺癌细胞A549中可特异性表达出TK蛋白,更昔洛韦细胞毒实验表明表达的TK蛋白具有酶活性,并可有效抑制体内肺癌的生长. 结论:SURV启动子调控的TK基因治疗载体,可特异性调控TK基因在A594肺癌细胞的表达并抑制肺癌细胞的生长,为应用自杀基因治疗肺癌提供了新的途径. |
| 关 键 词： | 肺癌 基因治疗 生存素 启动子 单纯疱疹病毒1型胸苷激酶 |
Construction of a karyotic expression vector involving HSV-1 thymidine kinase under the control by survivin promoter and its potential use in ling gene therapy |
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| YU Zhen,WANG Wei-yu,CAO Li-min. Construction of a karyotic expression vector involving HSV-1 thymidine kinase under the control by survivin promoter and its potential use in ling gene therapy[J]. Journal of Jiangsu University Medicine Edition, 2010, 20(5) | |
| Authors: | YU Zhen WANG Wei-yu CAO Li-min |
| Abstract: | |
| Keywords: | lung cancer gene therapy survivin promoter herpes simplex virus 1 thymidine kinase |
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