| 人RORγtm RNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用 |
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| 引用本文： | 王海生,王胜军,崔大伟,陈建国,柳迎昭,杨先知,史烨,田洁,仝佳,许化溪.人RORγtm RNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[J].江苏大学学报(医学版),2009,19(5):405-408. |
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| 作者姓名： | 王海生 王胜军 崔大伟 陈建国 柳迎昭 杨先知 史烨 田洁 仝佳 许化溪 |
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| 作者单位： | 1. 江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学和免疫检验学系,江苏,镇江,212013;武进中医院检验科,江苏,武进,213161
2. 江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学和免疫检验学系,江苏,镇江,212013
3. 江苏大学附属人民医院检验科,江苏,镇江,212002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，江苏省教育厅自然科学基金资助项目，江苏省卫生厅医学科研基金，江苏大学"拔尖人才工程"和高级人才基金项目 |
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| 摘 要： | 目的: 建立检测人RORγt(retinoid-related orphan receptor gammat) mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, qRT-PCR)方法.方法: 根据人RORγt mRNA的保守序列设计特异性引物,提取经PMA和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)总RNA,并逆转录成cDNA,与pMD-18T载体连接构建质粒标准品.采用qRT-PCR方法检测RORγt mRNA水平,并评价该方法的线性、特异性及重复性.应用该方法检测Graves病(Graves′ disease, GD)患者外周血中RORγt mRNA的相对表达.结果:该方法标准曲线的相关系数为0.998,融解曲线分析显示单个峰,pMD18T-RORγt质粒标准品高、低拷贝数的批内、批间变异系数分别为6.5%,8.4%和9.6%,11.2%.初步研究表明GD患者组RORγt mRNA的相对表达水平明显高于健康对照组(t=-3.72, P<0.01).结论: 建立的检测人RORγt mRNA的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法灵敏、特异且重复性好,为临床应用提供了实验基础.
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| 关 键 词： | RORγt 实时定量PCR SYBR Green Ⅰ |
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