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| 人类免疫缺陷病毒1型感染基因诊断方法的建立 | |
| 引用本文： | 魏民,关琪,梁浩,陈健平,陈钊,冯毅,洪坤学,邢辉,邵一鸣. 人类免疫缺陷病毒1型感染基因诊断方法的建立[J]. 中华检验医学杂志, 2003, 26(12): 772-776 |
| 作者姓名： | 魏民 关琪 梁浩 陈健平 陈钊 冯毅 洪坤学 邢辉 邵一鸣 |
| 作者单位： | 1. 100050,北京,中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防与控制中心病毒免疫室 2. 沈阳医学院附属中心医院检验科 3. 华中科技大学同济医学院公共卫生学院 |
| 基金项目： | 1999年度国家杰出青年科学基金资助项目(3992 50 30 )，国家重点基础研究发展规则项目(G1 9990 541 0 7) |
| 摘 要： | 目的 建立人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)基因诊断方法。方法 随机选取80份全国送检的已确认的HIV阳性样品，从健康献血员中选取40份HIV阴性样品。分别提取人DNA和病毒RNA，再分别扩增HIV-1的gp41、pol和gag各基因区的3套反应系统，进行巢氏聚合酶链反应(nPCR)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)。将结果与血清学方法比较，观察结果是否一致。同时检测3套反应系统的敏感性、重复性和对HIV-1各亚型参考病毒株的扩增情况。结果 用3套反应系统对80份阳性样本进行nPCR检测的阳性率为：gp41反应系统88．8％；pol反应系统83．8%；gag反应系统81．3％；3套系统联合应用检出率90.0％。用RT-PCR检测阳性率为：gp41反应系统96．3％；pol反应系统91．3％；gag反应系统95．0％；3套反应系统联合应用检出率可达98．8％。阴性样品扩增均阴性，特异性为100％。3套反应系统不但可扩增HIV-1型M组的A、B、C、D、CRF01-AE、F、G、H亚型，还可扩增其N和O组毒株，且与HIV-2无交叉反应。nPCR最低检测限为1拷贝／PCR。gag和pol反应系统RT-PCR最低检测限为750拷贝／ml；gp41反应系统最低检测限为150拷贝／ml。nPCR和RT一：PCR扩增gp41、pol和gag基因区的重复性分别为：93．3％、90．0％、86．70h，和100%、96．7％、100％。结论 建立的HIV-1基因诊断方法敏感性、特异性和重复性较好，且成本低廉，适合我国HIV检测实验室应用。 |
| 关 键 词： | 人类免疫缺陷病毒1型感染 基因诊断 艾滋病 聚合酶链反应 血清学诊断 |
| 修稿时间： | 2003-02-10 |
Development of HIV-1 laboratory diagnostic assay based on the nucleic acid detection |
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| Abstract: | |
| Keywords: | Human immunodeficiency virus Genes Polymerase chain reaction |
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