| 家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 彭建,刘巍巍,吴兆颖,杨燕琴,尚小丽,吴建伟.家蝇天蚕素Cec4的原核表达与纯化北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2019(2):182-185. |
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| 作者姓名： | 彭建 刘巍巍 吴兆颖 杨燕琴 尚小丽 吴建伟 |
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| 作者单位： | 1.贵州医科大学医药生物技术工程研究中心550025;2.贵州医科大学生物与工程学院;;3.贵州医科大学基础医学院; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(No.81660347)；贵州省卫生计生委科学技术基金项目(No.gzwjkj2017-1-009)；贵州省"2011协同创新中心"-贵州省健康大数据协同创新中心项目(黔教合协同创新字[2015]04)；贵州省教育厅青年科技人才成长项目(黔教合KY字[2016]148)；贵州医科大学博士启动基金项目(院博合J字[2015]002号) |
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| 摘 要： | 目的构建家蝇天蚕素(Cecropin)Cec4原核表达质粒,表达及纯化Cec4蛋白。方法从家蝇cDNA文库中筛选家蝇天蚕素基因Cec4,设计并合成特异性引物,PCR扩增Cec4基因,连接克隆载体后转入DH5α感受态细胞,通过重组子鉴定及测序完成目的基因的克隆。用限制性内切酶BamHI和HindⅢ双酶切目的基因和质粒,构建GST表达载体pGEX 4T-1-Cec4,转化到大肠埃希菌BL-21中,利用IPTG诱导表达重组Cec4蛋白,经亲和层析纯化后进行SDS-PAGE电泳分析。结果 PCR扩增获得的Cec4基因全长为192 bp,连接到表达载体pGEX 4T-1获得重组质粒pGEX 4T-1-Cec4,转化大肠埃希菌BL-21后经30℃、0.6 mmol/L的IPTG诱导18 h,表达相对分子质量约为26×10~3上清表达的融合蛋白,亲和层析纯化后的蛋白浓度为0.117 mg/ml。结论成功构建重组质粒pGEX 4T-1-Cec4并表达和纯化获得Cec4蛋白,为其进一步研究奠定了实验基础。
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| 关 键 词： | 家蝇 CEC4 克隆 原核表达 |
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