| 抗重组志贺毒素ⅡB亚基单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定 |
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| 作者姓名： | 陈洪章 邹全明 罗萍 毛旭虎 曾浩 马颖 余抒 曾明 |
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| 作者单位： | 第三军医大学临床微生物学及临床免疫学教研室,重庆,400038;中国药品生物制品检定所,北京,100000 |
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| 基金项目： | 军队攻关项目 , 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 目的 制备出高效价的抗重组志贺毒素ⅡB亚基(rStx2B)单克隆抗体.方法 以融合蛋白EspA-Stx2B作为抗原,免疫Balb/c小鼠,以未免疫的Balb/c小鼠脾细胞为饲养细胞;运用细胞杂交瘤技术制备,运用间接ELISA法筛选产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株;体内诱生法产生腹水,饱和硫酸铵沉淀法初步纯化,再采用HiTrap rProtein A柱进一步纯化,快速定性试纸鉴定McAb的Ig亚型,采用间接ELISA法相加实验鉴定抗原识别表位.结果 获得3株产生针对rStx2B的单克隆抗体细胞株Stx2B-1H9、Stx2B-1H10、Stx2B-3E5,Ig亚型分别为IgG1κ型,IgG2aκ型,IgG2bκ型,亲和力常数分别为7.36×108、6.94×108、5.85×108.结论 成功制备3株稳定分泌抗rStx2B的杂交瘤细胞株,产生的McAb特异性好,亲和力高,为应用这些单克隆抗体建立免疫亲和层析法纯化天然志贺毒素Ⅱ,鉴定Stx2B的表位,研究针对EHEC O157:H7感染的治疗性抗体奠定了基础.
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| 关 键 词： | 志贺毒素ⅡB亚基 单克隆抗体 生物学特性 |
| 文章编号： | 1000-8861（2007）02-0148-04 |
| 收稿时间： | 2006-10-24 |
| 修稿时间： | 2006-12-05 |
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