优化脂肪间充质干细胞外泌体提取方法的研究

目的 本研究旨在探讨用外泌体提取试剂盒提取脂肪间充质干细胞源性外泌体的优化方法。方法 采用组织块贴壁法分离提取和培养原代脂肪间充质干细胞。收集1000mL 3～6代脂肪间充质干细胞的细胞上清,用100KD超滤离心管进行浓缩,外泌体提取试剂盒提取外泌体,测定外泌体悬液蛋白浓度后进行鉴定。结果 脂肪间充质干细胞的形态主要以长梭形为主;外泌体悬液的蛋白浓度,经BCA法测定为7.66 mg/mL;透射电镜、NTA、蛋白质印迹法结果均符合外泌体的典型特征。结论 在使用外泌体提取试剂盒(invitrogen)之前,用100KD的超滤管对1000mL细胞上清进行浓缩的方法可以成功提取到外泌体,而且是一种有效节省外泌体提取试剂盒剂量的方法。