| SMAD家族成员4 shRNA干扰慢病毒构建与分析 |
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| 引用本文： | 李忱炜.SMAD家族成员4 shRNA干扰慢病毒构建与分析[J].检验医学与临床,2015,12(11). |
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| 作者姓名： | 李忱炜 |
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| 作者单位： | 重庆市渝北区人民医院检验科 401120 |
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| 摘 要： | 目的制备shRNA干扰人SMAD家族成员4(SMAD4)的慢病毒载体(shRNA-SMAD4),为深入研究BMPs/SMAD信号通路奠定基础。方法利用在线干扰设计网页进行干扰引物设计,根据小干扰RNA的设计原则,选取3对针对SMAD4特异性干扰引物而合成。合成的片段连接到慢病毒载体质粒pSIH1-H1,形成pSIH1-H1-shRNA-SMAD4质粒。用PCR及测序对其鉴定,然后与慢病毒包装质粒混匀,由脂质体转染至HEK293T细胞进行包装,产生慢病毒shRNA-SMAD4,并收集上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,通过RT-PCR及Western Blot鉴定重组慢病毒干扰效果。结果(1)shRNA干扰SMAD4特异性引物的获得。(2)pSIH1-H1-shRNA SMAD4质粒经PCR验证和测序后,证实构建成功。(3)shRNA-SMAD4在HEK293T中重组成慢病毒,并成功感染MDA-MB-231。(4)shRNA-SMAD4感染乳腺癌MDA-MB-231细胞后SMAD4的表达降低。结论成功构建shRNA-SMAD4慢病毒载体,并能有效抑制SMAD4表达。
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| 关 键 词： | 慢病毒载体 短发卡RNA SMAD家族成员4 |
SMAD4 shRNA interference lentivirus build and analysis |
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| Li Chen-wei.SMAD4 shRNA interference lentivirus build and analysis[J].Laboratory Medicine and Clinic,2015,12(11). |
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| Authors: | Li Chen-wei |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | recombinant lentivirus vector shRNA human SM AD4 |
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