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| 重组TNF-α衍生物RMPT的制备及其抗肿瘤作用初步研究 | |
| 作者姓名： | 叶祖禄 马义 徐文娜 罗天杰 饶磊 洪岸 |
| 作者单位： | 暨南大学细胞生物学系暨南大学生物医药研究院广东省生物工程药物重点实验室基因工程药物国家工程研究中心 |
| 基金项目： | 广东省自然科学基金项目(No.S2012010008756);高等学校博士学科点专项科研基金项目(20124401120012);广东省高等学校科技创新项目(2012KJCX0015);广东省教育部产学研结合项目(No.2010B090400544);广州市科技计划项目(No.2011J4300112);中央高校基本科研业务费专项资金资助项目(No.21612408);科技部科技型中小企业技术创新基金项目(No.11C26214413218);广州市科技计划项目(No.2010Z2-C321);国家“863”项目(No.2006AA02Z125) |
| 摘 要： | 利用基因重组技术制备具有抗肿瘤作用的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)衍生多肽RMPT,并研究其体外生物学效应。PCR方法合成RMPT基因序列,定向插入高效表达载体pTXB1-MCS,在大肠杆菌ER2566中诱导表达重组融合蛋白并建立RMPT融合蛋白诱导表达的优化体系。N端自动切割、纯化、HPLC制备获得RMPT,电泳和质谱鉴定其分子质量。CCK-8检测RMPT对肿瘤细胞的抑制作用。实验结果表明:重组工程菌可溶性RMPT融合蛋白最佳诱导表达条件为37℃、8 h、IPTG浓度0.75 mmol/L;DTT诱导蛋白内含肽自剪切固相纯化和HPLC制备重组肽RMPT,纯度大于95%,电泳和质谱鉴定其分子质量为3.7 ku,结果与理论值相符合,其产率为10.8 mg/L发酵液;体外研究表明,RMPT能够高效抑制多数肿瘤细胞增殖。 |
| 关 键 词： | TNF-α衍生多肽 基因重组 表达优化 抗肿瘤作用 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |