siRNA干扰立早蛋白ICP4对HSV-1病毒复制能力的影响 |
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作者姓名: | 刘玉涛 王喜 宋波 许予明 韩志强 赵莘瑜 贾丽洁 王亚仑 |
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作者单位: | 1. 河南大学淮河医院,开封,475000;郑州大学第一附属医院 2. 河南大学环境与规划学院 3. 郑州大学第一附属医院 |
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基金项目: | 河南省教育厅河南省基础与前沿技术研究计划项目,河南省教育厅河南省基础与前沿技术研究计划项目,河南省教育厅自然科学研究计划项目 |
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摘 要: | 目的观察siRNA作用于HSV-1病毒的ICP4后对HSV-1复制能力的影响。方法设计两段靶向HSV-1 ICP4的siRNA和一段阴性对照序列,酶切连接法构建重组质粒pLKO-puror-hU6-siRNA/CON;脂质体法包装重组慢病毒pLKO-puror-hU6-siRNA/CON;嘌呤霉素筛选法建立抗ICP4的siRNA单克隆细胞系(VERO115、VERO3604、VERO115+3604、VERO-CON);TCID50法检测siRNA对HSV-1的病毒复制能力的影响。结果成功构建重组质粒pLKO-puror-hU6-siRNA/CON;获得重组慢病毒pLKO-puror-hU6-siRNA/CON;成功构建四个抗ICP4的siRNA单克隆细胞系;BAC-HSV-1-GFP病毒感染单克隆细胞系,siRNA作用后野生型VERO细胞的细胞病变效应(CPE)及绿色荧光蛋白(GFP)表达率均近100%,VERO-CON细胞达90%以上。siRNAVERO115及VERO3604的CPE及GFP表达率明显高于VERO115+3604细胞,P〈0.05。且不同位点联合干扰对病毒的抑制作用强于单一位点干扰,低于VERO115和VERO3604,P〈0.05。结论抗ICP4的siRNA对HSV-1的复制有明显的抑制作用,且不同位点siRNA联合干扰对病毒的复制有协同抑制效果。
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关 键 词: | RNA,小分子干扰 ICP4 疱疹病毒1型,人 病毒复制 |
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