V型腺病毒纤维蛋白基因真核表达质粒的构建及表达 |
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引用本文: | 付员根,刘志国,温博贵,王晓侠,吴开春,樊代明. V型腺病毒纤维蛋白基因真核表达质粒的构建及表达[J]. 中国肿瘤生物治疗杂志, 2002, 9(1): 27-31 |
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作者姓名: | 付员根 刘志国 温博贵 王晓侠 吴开春 樊代明 |
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作者单位: | 1. 汕头大学医学院生化与分子生物学教研室,广东,汕头,515031 2. 第四军医大学全军消化病研究所 3. 西安交通大学第二医院耳鼻喉科,陕西,西安,710032 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(39970834)资助、军队"十五"医药卫生科研基金重点项目(01Z087)资助 |
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摘 要: | 目的:构建腺病毒纤维蛋白基因的真核表达质粒,并检测其在真核细胞中的表达,为腺病毒靶向性载体构建创造条件。方法:采用限制性内切酶技术,酶切腺病毒骨架质粒pAdEasy-1,经多次亚克隆,最后完成克隆纤维蛋白基因并构建其真核表达质粒,用脂质体法将构建好的真核表达质粒瞬时转染COS-7细胞,于转染后72h,用Western blot法检测所表达的蛋白。结果:克隆成功纤维蛋白基因,并构建纤维蛋白基因真核表达质粒pcDNA/Fiber,经限制性内切酶酶切鉴定及测序证实了其正确性,Western blot结果显示,新表达蛋白在变性条件下大小为62kD,而在非变性条件下为186kD。结论:纤维蛋白基因真核表达质粒能在真核细胞中表达,产物具有三聚体结构。可用于腺病毒靶向性载体的构建。
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关 键 词: | 基因转染 V型腺病毒 纤维蛋白 真核表达质粒 构建 |
文章编号: | 1007-385X(2002)01-0027-05 |
修稿时间: | 2001-05-20 |
Construction of the Eukaryotic Expression Plasmid Harbouring Adenovirus Type 5 Fiber Gene and Its Expression in COS-7 Cell |
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Abstract: | |
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