| 针对人NeuroD基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定 |
| |
| 引用本文： | 王洋,高莉,卜海激,陈颖,朱明华. 针对人NeuroD基因RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定[J]. 第二军医大学学报, 2013, 34(11): 1257-1261 |
| |
| 作者姓名： | 王洋 高莉 卜海激 陈颖 朱明华 |
| |
| 作者单位： | 第二军医大学长海医院病理科,上海 200433*通信作者 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金(30770996,81172310),长海医院“1255学科建设计划”(CH125521106). |
| |
| 摘 要： | 目的 构建并鉴定人神经源性分化蛋白基因(NeuroD)RNA干扰慢病毒表达载体。方法 根据已公布的NeuroD基因序列(GenBank:NM_002500),设计并合成4 对shRNA(NeuroD1~D4),与载体pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR连接,构建pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-NeuroD 表达载体,转化入感受态细胞DH5α; real-time PCR 技术检测pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-NeuroD表达载体对293T细胞内靶基因的干扰效果。将筛选出的干扰载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-NeuroD1与慢病毒载体pLenti6.3/V5-DEST经酶切后连接,构建慢病毒表达载体pLenti6.3-EGFP-NeuroD1-miR。用构建的慢病毒表达载体和包装质粒(Packaging Mix)共转染293T细胞,包装病毒,收集病毒原液,超速离心浓缩,并测定滴度。采用PCR法对重组载体进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果 成功构建针对靶基因的4个干扰质粒,测序结果表明,4个pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-NeuroD表达载体序列与参考序列一致,real-time PCR 检测显示以pcDNATM 6.2-GW/EmGFP-miR-NeuroD1的沉默效应最佳(P<0.01)。将重组获得的慢病毒表达载体pLenti6.3-EGFP-NeuroD1-miR转染至293T细胞株,酶切鉴定及PCR结果与病毒载体的预期一致,病毒滴度达1.18×108 ifu/mL。结论 成功构建、筛选了针对人NeuroD基因的RNA干扰慢病毒表达载体。
|
| 关 键 词： | 慢病毒 NeuroD基因 RNA干扰 胰腺肿瘤 |
| 收稿时间： | 2013-05-01 |
| 修稿时间： | 2013-07-09 |
Construction and identification of RNAi leniviral vector targeting NeuroD |
| |
| WANG Yang,GAO Li,BU Hai ji,CHEN Ying and ZHU Ming hua. Construction and identification of RNAi leniviral vector targeting NeuroD[J]. Former Academic Journal of Second Military Medical University, 2013, 34(11): 1257-1261 |
| |
| Authors: | WANG Yang GAO Li BU Hai ji CHEN Ying ZHU Ming hua |
| |
| Affiliation: | Department of Pathology, Changhai Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China*Corresponding author. |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《第二军医大学学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《第二军医大学学报》下载全文 |
|
