| 乙型肝炎病毒前S1结合蛋白的筛选和鉴定 |
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| 引用本文： | 李丹,王小众,林纳,陈丰霖. 乙型肝炎病毒前S1结合蛋白的筛选和鉴定[J]. 中华传染病杂志, 2007, 25(1): 20-24 |
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| 作者姓名： | 李丹 王小众 林纳 陈丰霖 |
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| 作者单位： | 350001,福州,福建医科大学附属协和医院消化科 |
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| 基金项目： | 福建省自然科学基金(C0310018) |
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| 摘 要： | 目的利用酵母双杂合体系筛选HBV前S1结合蛋白,进一步探讨前S1蛋白在HBV感染中的作用。方法PCR扩增HBV前S1基因序列,根据酵母双杂合体系构建饵质粒pAS2-1- preS1,并测定序列;饵质粒转化入酵母菌AH109,Western印迹法证实前S1-BD融合蛋白在酵母细胞中的正确表达。pAS2-1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞,通过选择性培养及β-半乳糖苷酶活性测定筛选阳性菌落,分离实验排除假阳性克隆,扩增阳性克隆的目的基因并测定序列,查询其同源序列,行交合实验进一步证实目的蛋白同前S1蛋白在酵母细胞中能否特异性结合。结果成功构建pAS2-1-preS1饵质粒,Western印迹法证实转化饵质粒的酵母细胞能正确表达前S1- BD融合蛋白,pAS2-1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养出101个菌落,经β-半乳糖苷酶活性测定及分离实验后筛选出1个阳性克隆,其cDNA插入片段与丝裂原活化蛋白激酶-胞外信号调节蛋白激酶(MAPK-ERK)激酶1(MEK1)基因高度同源。交合实验证实MEK1同前S1蛋白在酵母细胞中可特异性结合。结论酵母双杂合体系证实MEK1可能是一个前S1结合蛋白。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒 乙型 前S1蛋白 酵母双杂合体系 |
| 修稿时间： | 2005-11-15 |
Screening and identifying hepatitis B virus preS1-interactive protein |
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| LI Dan,WANG Xiao-zhong,LIN Na,CHEN Feng-lin. Screening and identifying hepatitis B virus preS1-interactive protein[J]. Chinese Journal of Infectious Diseases, 2007, 25(1): 20-24 |
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| Authors: | LI Dan WANG Xiao-zhong LIN Na CHEN Feng-lin |
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| Affiliation: | Department of Digestive, Union Hospital of Fujian Medical University, Fuzhou 350001 , China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatitis B virus PreS1 protein Yeast two hybrid system |
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