| 人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 |
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| 引用本文： | 郭泽峰, 段作营, 张莲芬, 金坚, 李华钟. 人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J]. 中国药科大学学报, 2008, 39(1): 82-86. |
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| 作者姓名： | 郭泽峰 段作营 张莲芬 金坚 李华钟 |
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| 作者单位： | 1.江南大学医药学院;2.江南大学教育部工业生物技术重点实验室 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 目的:构建编码人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,在毕赤酵母(Pichiapastria)中进行表达,获得具有白介素-2(IL-2)活性的融合蛋白。方法:通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA,再通过重叠PCR方法,将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来,克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19/IH。用EcoRI和NotI双酶切pMD19/IH和pPIC9K两种质粒,通过琼脂糖凝胶电泳分离,试剂盒纯化,将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒,利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH;CTLL-2/MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果:成功构建了人白介素-2/人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH,融合蛋白得到了较理想的表达;重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U/mL的生物学活性。结论:成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2/血清白蛋白融合蛋白,该研究结果未见文献报道。
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| 关 键 词： | 人白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白 表达 |
| 文章编号： | 1000-5048（2008）01-0082-04 |
| 收稿时间： | 2007-08-18 |
| 修稿时间： | 2007-08-18 |
Determination of thiopurine methyltransferase activity in human red blood cells by HPLC |
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| Determination of thiopurine methyltransferase activity in human red blood cells by HPLC[J]. Journal of China Pharmaceutical University, 2008, 39(1): 82-86. |
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| Authors: | MAO Chen-mei L(U Wen-li WAN Shu-xin XUE Feng PING Qi-neng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hmnan interleukin-2 human serum album Pichia pastria fusion protein expression |
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