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| 人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达 | |
| 引用本文： | 郭泽峰,段作营,张莲芬,金坚,李华钟.人白介素-2/人血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的表达[J].中国药科大学学报,2008,39(1):82-86. |
| 作者姓名： | 郭泽峰 段作营 张莲芬 金坚 李华钟 |
| 作者单位： | 1. 江南大学,医药学院,无锡,214122;江南大学,教育部工业生物技术重点实验室,无锡,214122 2. 江南大学,教育部工业生物技术重点实验室,无锡,214122 3. 江南大学,医药学院,无锡,214122 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
| 摘 要： | 目的：构建编码人白介素-2／人清白蛋白的重组表达质粒pPIH，在毕赤酵母（Pichia pastria）中进行表达，获得具有白介素-2（IL-2）活性的融合蛋白。方法：通过逆转录方法从人外周血单核细胞得到人IL-2的cDNA，再通过重叠PCR方法，将编码人IL-2的cDNA和编码人白蛋白的cDNA拼接起来，克隆至T载体获得含有融合基因IH的质粒pMD19／IH。用Eco RI和NotI双酶切pMD19／IH和pPIC9K两种质粒，通过琼脂糖凝胶电泳分离，试剂盒纯化，将IH片段和pPIC9K连接获得表达型pPIH的重组质粒，利用电转化方法转化毕赤酵母KM71获得重组表达质粒pPIH；CTLL-2／MTT法测定融合蛋白中人IL-2活性。结果：成功构建了人白介素-2，人血清白蛋白的重组表达质粒pPIH，融合蛋白得到了较理想的表达；重组菌经甲醇诱导表达后含有融合蛋白IL-2-HSA发酵上清液表现100U／mL的生物学活性。结论：成功获得具有人IL-2生物活性的重组人白介素-2，血清白蛋白融合蛋白，该研究结果未见文献报道。 |
| 关 键 词： | 人白介素-2 人血清白蛋白 毕赤酵母 融合蛋白 表达 重组人白介素 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母 诱导表达 encoding expression of gene Construction Pichia fusion protein serum 文献 研究 生物活性 生物学活性 表现 上清液 发酵 甲醇 重组菌 |
| 文章编号： | 1000-5048（2008）01-0082-04 |
| 收稿时间： | 2007-08-18 |
| 修稿时间： | 2007年8月18日 |
Determination of thiopurine methyltransferase activity in human red blood cells by HPLC |
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| MAO Chen-mei,L.Determination of thiopurine methyltransferase activity in human red blood cells by HPLC[J].Journal of China Pharmaceutical University,2008,39(1):82-86. | |
| Authors: | MAO Chen-mei L |
| Abstract: | |
| Keywords: | hmnan interleukin-2 human serum album Pichia pastria fusion protein expression |
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