血清FT3,FT4的固相二抗法实验探讨

FT_3、FT_4的检测在国外始于70年代,至80年代已普遍采用基于液相RIA的模拟实验。近年来,许多厂家相继推出了基于固相一抗的RIA方法,使反应和结合相游离的分离在同一管中完成,操作简便快速,尤其适于大量标本的集中检测。我们建立的FT_3、FT_4固相二抗RIA,进一步发展了上述方法,现将结果报告如下。 材料和方法 一、试剂: (一)第二抗休:驴抗羊抗体,本室用驴抗羊抗血清,经40％硫酸铵沉淀一次,再经35％硫酸铵沉淀二次,制得粗提品,加0.1％NaN_3,-20℃冻存备用。 (二)试管:常规试验用78mm,φ13试管。 (三)~(125)I-T_3X,~(125)I-T_4X均为本公司制备(60000cpm/100μl。 (四)羊抗人T_3抗血清,羊抗人T_4抗血清,未经纯化,滴度>1∶10万。 (五)包被液:50mmol/L pH4.8柠檬酸盐缓冲液。 (六)封闭液:含0.6％BSA及0.1％NaN_3的20mmol/L,pH7.4PBS。 (七)对照用试剂盒:FT_3、FT_4RIA;FT_3、FT_4固相一抗RIA;TT_3、TT_4RIA kit均为本公司产品。 二、固相抗体制备:将纯化的驴抗羊IgG用包被液配成60μg/ml,每管加400μl,置37℃5h,吸出包被液;加入封闭液400μl,置4℃过夜,吸出封闭液,室温干燥,塑料袋密封4℃保存。 三、方法: (一)取已包被固相二抗试管,加入标准品100μl;~(125)I-T_3X(或~(125)I-T_4X)标记物100