| 野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能 |
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| 引用本文： | 贺子建,卞留贯,贺华,孙青芳,赵卫国,沈建康.野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能[J].中国现代神经疾病杂志,2007,7(4):347-351. |
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| 作者姓名： | 贺子建 卞留贯 贺华 孙青芳 赵卫国 沈建康 |
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| 作者单位： | 200025,上海交通大学医学院附属瑞金医院神经外科,上海交通大学医学院神经病学研究所 |
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| 基金项目： | 上海市科委资助项目;上海市科委资助项目 |
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| 摘 要： | 目的构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因（NF2）Ⅱ亚型的真核表达载体，观察其在人胚胎肾细胞293（HEK293）中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞（RT4）后的功能。方法以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板．应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2Ⅱ亚型基因，并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中：经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2Ⅱ亚型，用Lipofectamine2000脂质体导人人胚胎肾细胞293，通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平：随后转染大鼠神经鞘瘤细胞．利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响。结果经序列分析证实，克隆的NF2Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致。DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示，经双酶切后的质粒pEGFPcDNA片段大小约为4700bp：NF2Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为l770bp，NF2Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293，通过荧光显微镜和Westem Blotting方法得到证实；水溶性四氮唑法检测显示，转染pEGFP-NF2Ⅱ亚型并表达NF2Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同。结论所构建的野生型NF2Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达，且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性。
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| 关 键 词： | 基因 神经纤维瘤病2型 聚合酶链反应 质粒 转染 基因表达 |
| 修稿时间： | 2007-07-18 |
Construction of eukaryotic expression vector and detection of its function of wild type NF2 Ⅱ gene |
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| HE Zi-jian,BIAN Liu-guan,HE Hua,SUN Qing-fang,ZHAO Wei-guo,SHEN Jian-kang.Construction of eukaryotic expression vector and detection of its function of wild type NF2 Ⅱ gene[J].Chinese Journal of Contemporary Neurology and Neurosurgery,2007,7(4):347-351. |
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| Authors: | HE Zi-jian BIAN Liu-guan HE Hua SUN Qing-fang ZHAO Wei-guo SHEN Jian-kang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Gene neurofibromatosis 2 Polymerase chain reaction Plasmids Transfection Gene expression |
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