| 靶向mcl-l基因的shRNA真核表达质粒的构建与筛选 |
| |
| 引用本文： | 李银鹏,朱惠明,侯晓华.靶向mcl-l基因的shRNA真核表达质粒的构建与筛选[J].世界华人消化杂志,2008,16(26):2940-2945. |
| |
| 作者姓名： | 李银鹏 朱惠明 侯晓华 |
| |
| 作者单位： | 李银鹏 (华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,湖北省武汉市,430030)； 朱惠明 (暨南大学第二临床医学院深圳市人民医院消化内科,广东省深圳市,518020)； 侯晓华 (华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科,湖北省武汉市,430030)； |
| |
| 摘 要： | 目的: 构建靶向髓细胞白血病基因-1(myeloid cell leukemia-1,mcl-1)的shRNA的真核表达质粒,并筛选出沉默mcl-1基因效果最明显的shRNA表达质粒.方法: 设计3对针对mcl-1基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNAfi片段的真核表达质粒(shRNAl-3)并行酶切鉴定和测序分析.然后通过脂质体将重组质粒转染到肝癌细胞株HepG2中,48 h后测定转染率,并分别采用RT-PCR及Western blot检测mcl-1 mRNA和蛋白表达情况.结果: 重组质粒经酶切鉴定与测序证实构建成功.质粒在HepG2细胞中的转染率约为64%.shRNAl-3导入HepG2细胞48 h后.mcl-1,mRNA水平和蛋白水平均明显低于空白对照组和阴性对照组(0.61±0.02,0.56±0.02,0.46±0.01 vs 0.97±0.01,0.95±0.00;0.53±0.01.0.48±0.03,0_36±0.01vs0.90±0.03.0.88±0.01,均P<0.01).与shRNAl和shRNA2相比,shRNA3对mcl-1 mRNA和蛋白的抑制作用均最强(52.6%VS 36.3%,42.9%:63.2%vs41.5%,49.6%,均P<0.01).结论: 成功构建并筛选出的靶向mcl-1的shRNA真核表达质粒对肝癌细胞HepG2内的mcl-1表达具有明显抑制作用.
|
| 关 键 词： | 髓细胞白血病基因 肝细胞癌 RNA干扰 短发夹状RNA |
Construction and screening of eukaryotic expression plasmids containing short hairpin RNA targeting at the myeloid cell leukemia-1 gene |
| |
| Yin-Peng Li,Hui-Ming Zhu,Xiao-Hua Hou.Construction and screening of eukaryotic expression plasmids containing short hairpin RNA targeting at the myeloid cell leukemia-1 gene[J].World Chinese Journal of Digestology,2008,16(26):2940-2945. |
| |
| Authors: | Yin-Peng Li Hui-Ming Zhu Xiao-Hua Hou |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
|
