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| 结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-CFP21融合蛋白克隆表达及全血IFN-γ的检测 | |
| 作者姓名： | 周舟 丁元生 刘忠华 毛翎 桂徐蔚 胡忠义 |
| 作者单位： | 苏州大学基础医学与生命科学学院； 同济大学附属上海市肺科医院/上海市结核病(肺)重点实验室； |
| 基金项目： | 国家科技重大专项课题资助项目(2008ZX10003003-02); 上海市公共卫生重点学科建设项目(08GWZX0104); 上海市科科资助项目(07DZ22012,08DZ2291500,08DZ2271300) |
| 摘 要： | 目的构建结核分枝杆菌CFP10-ESAT-6-CFP21(CE21)融合蛋白的重组质粒,通过IFN-γ的检测探讨CE21在结核病检测中的价值。方法通过聚合酶链式反应(PCR)扩增获得CFP21和CFP10-ESAT-6(CE)基因片段,分别连接到pMD18-T,并将两片段2次连接到表达载体pET21a(+)中,获得pET21a-CFP10-ESAT-6-CFP21重组质粒;经表达纯化和复性后,去除内毒素,利用酶联免疫吸附试验检测48例结核病患者、30例非结核肺部疾病患者及32例健康对照者全血中IFN-γ的释放量。结果CE21经SDS-PAGE分析后相对分子质量为45,与预期大小一致。CE21融合蛋白全血标本IFN-γ的检测,结核组阳性率为72.9%,非结核疾病对照组和健康对照组阳性率分别为3.3%和3.1%。结论成功获得CE21融合蛋白,IFN-γ的检测证明该融合抗原具有良好的结核病检测价值。 |
| 关 键 词： | 分枝杆菌 结核 重组融合蛋白质类 抗原 细菌 干扰素Ⅱ型 |
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