Tyrphostin AG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的:观察TyrphostinAG34对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法:利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-³²P]ATP或[γ-³²P]GTP的[³²P]放射活度来检测。结果:重组人CK2是一种Ca²⁺、cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG34对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用,IC₅₀为1.0 μmol·L^-1,抑制作用远大于CK2已知抑制剂5 ,6 -二氯-1-β-呋喃糖苯并咪唑(DRB)和N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。AG34对重组人CK2的动力学研究表明:它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论:AG34不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的蛋白激酶CK2的抑制剂.重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。