大鼠Akt1基因真核表达载体构建及其在293细胞中的表达 |
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作者姓名: | 张睿 宋 纯 王 辉 |
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作者单位: | 辽宁省肿瘤医院,辽宁省肿瘤医院大肠外科,辽宁省肿瘤医院大肠外科 |
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摘 要: | 背景: Akt在细胞存活、细胞增殖、细胞代谢和细胞凋亡等活动中扮演着重要角色。虽然Akt的作用机制目前尚有很多的未知领域,但其作为生存信号的一个重要组件,已成为近年分子生物研究中的一个重要课题。目的:构建Akt1基因真核表达载体 pDC316-Akt1,观察其在293细胞(人胚肾母细胞)中的表达。设计、时间及地点:观察性实验,于2006-09/12在解放军军事医学科学院分子生物实验室完成。材料:pDC316质粒,由本元正阳公司提供;DH5α、293细胞为自备。方法:采用反转录-聚合酶链反应方法自大鼠肝组织总RNA中克隆Akt1DNA片段,测序鉴定正确后,插入真核表达载体pDC316的EcoR Ⅰ、Hind Ⅲ的酶切位点,构建Akt1真核表达载体 Akt-pDC316,脂质体介导法转染293细胞。主要观察指标:蛋白免疫印迹检测转染293细胞中Akt1的表达。结果:经测序鉴定,构建的Akt1氨基酸序列与野生型Akt1序列完全相符。将Akt-pDC316转入293细胞,蛋白免疫印迹检测可见相对分子质量55 000位置有Akt1的表达。结论:构建Akt1基因真核表达载体在293细胞中可以充分的表达。
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关 键 词: | AKT1;真核表达载体;293细胞;组织构建 |
收稿时间: | 2009-04-08 |
修稿时间: | 2009-04-08 |
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