新生大鼠耳蜗基底膜上皮细胞层的分离：酶消化与机械解剖可否使分离部分细胞失去活性

目的：探讨利用酶消化和机械解剖相结合方法分离新生大鼠耳蜗上皮细胞层的方法。方法：实验于2003-02／06在解放军总医院耳鼻咽喉科研究所进行。取新出生SD大鼠耳蜗基底膜后，将其放人含有嗜热菌蛋白酶的D．Hank溶液中，37℃孵箱孵育25min进行酶消化，然后在高倍显微镜下应用自制的超细钨丝刀进行显微机械分离。对分离的耳蜗上皮细胞层进行半薄切片硼砂甲苯胺蓝染色与耳蜗冰冻切片苏木精一伊红染色进行形态对比。结果：①分离后的耳蜗基底膜上皮层在显微镜下呈透明的薄片样组织，其内的各种细胞形态保持完好。②硼砂甲苯胺蓝染色与苏木精一伊红染色进行形态比较发现，分离的耳蜗基底膜上皮层只含有基底膜上的上皮组织，包括耳蜗感觉上皮和非感觉上皮，即只有内毛细胞、外毛细胞、小上皮嵴、大上皮嵴和支持细胞，是纯净的上皮组织而没有任何的结缔组织。结论：利用37℃和25min时间的酶消化法及机械解剖相结合的实验技术可以分离出纯粹的耳蜗上皮细胞层，为进一步纯化上皮内的各种细胞，进行各种基因转染试验以及耳蜗内的各种基础实验建立细胞模型并提供有效地实验手段。