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| 强抗原决定簇hAFP542-550在真核细胞膜定位表达研究 | |
| 引用本文： | 羊东晔,李彩虹,蓝方,张扬清,卢放根,杨峥嵘,黄来强.强抗原决定簇hAFP542-550在真核细胞膜定位表达研究[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(7). |
| 作者姓名： | 羊东晔 李彩虹 蓝方 张扬清 卢放根 杨峥嵘 黄来强 |
| 作者单位： | 1. 中南大学湘雅二医院消化内科,湖南,长沙,410011;清华大学深圳研究生院生命学部生物医药中心暨深圳市基因与抗体治疗重点实验室,广东,深圳,518055 2. 中南大学湘雅二医院消化内科,湖南,长沙,410011 3. 清华大学深圳研究生院生命学部生物医药中心暨深圳市基因与抗体治疗重点实验室,广东,深圳,518055 |
| 基金项目： | 国家自然基金资助项目，中国博士后基金资助项目，广东省自然科学基金资助项目 |
| 摘 要： | 目的:构建包含甲胎蛋白强抗原决定簇hAFP542-550、 EGFP 和GPI锚定蛋白GPC3三者组成的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达质粒pGPC3-EGFP, 确定其定位表达在真核细胞膜上, 以强化靶细胞的免疫原性.方法:①采用RT-PCR方法从人胎盘组织总RNA中调取GPC3基因, 化学合成基因片段-KOZAK-GPCN+afp542-550-, 并从pEGFP-N1质粒中扩增EGFP基因, 三者嵌合构建融合蛋白的表达质粒pcDNA3.1(+)/GPCN+afp542-550-EGFP-GPCC(pGPC3-EGFP);②以Lipofectamine 2000转染质粒pGPC3-EGFP 入肝癌细胞株HepG2(GPC3+AFP+), 转染后24 h和48 h引物GPCN-F和EGFP-r RT-PCR及Western blot检测融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP表达;③对照质粒pEGFP-N1和pGPC3-EGFP转染HepG2, 荧光显微镜观察比较两种质粒EGFP蛋白表达的部位;pGPC3-EGFP转染人胚肾HEK293细胞(GPC3-AFP-), 提取细胞膜蛋白和可溶蛋白Western blot检测融合蛋白表达.结果:①成功构建pGPC3-EGFP质粒;②融合蛋白可在 HepG2中表达;③与pEGFP-N1不同, 融合蛋白主要在胞膜上出现荧光反应, 胞质内仅见散在零星荧光;转染后HEK293细胞的膜蛋白中检测到融合蛋白表达, 而可溶蛋白中未检出.结论:pGPC3-EGFP可以在真核细胞中表达, 表达的融合蛋白GPC3-hAFP542-550-EGFP仍然定位表达在细胞膜, 是一种新型GPI再锚定蛋白. |
| 关 键 词： | 人AFP542-550 glypican3 增强绿色荧光蛋白EGFP 真核细胞 蛋白质工程 |
Expression and localization of strong epitope hAFP542-550 on eukaryotic cytoplasmic membrane |
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| YANG Dong-ye,LI Cai-hong,LAN Fang,ZHANG Yang-qing,LU Fang-gen,YANG Zheng-rong,HUANG Lai-qiang.Expression and localization of strong epitope hAFP542-550 on eukaryotic cytoplasmic membrane[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2009,25(7). | |
| Authors: | YANG Dong-ye LI Cai-hong LAN Fang ZHANG Yang-qing LU Fang-gen YANG Zheng-rong HUANG Lai-qiang |
| Abstract: | |
| Keywords: | |
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