| 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 陈杰,高下,朱敏生,张文程,麻晓峰,顾香芳. 真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1的构建及其在HEK293T细胞中的表达[J]. 中国现代医学杂志, 2007, 17(18) |
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| 作者姓名： | 陈杰 高下 朱敏生 张文程 麻晓峰 顾香芳 |
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| 作者单位： | 1. 南京大学医学院附属南京市鼓楼医院,耳鼻咽喉科,江苏,南京,210008
2. 南京大学模式动物研究所,江苏,南京,210061 |
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| 基金项目： | 江苏省南京市医学科技发展计划 |
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| 摘 要： | 目的构建真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,并验证其在HEK293T细胞中的表达。方法从人的全血标本中提取DNA模板,经PCR获得Hath1-cDNA,将Hath1-cDNA和pIRES2-DsRed2质粒用限制性内切酶XhoⅠ、EcoRⅠ双酶切,酶切产物琼脂糖凝胶电泳,割胶纯化,前者回收1065bp片断,后者回收大片断,再将回收的2个片断用T4DNA连接酶连接,转化感受态DH5α细胞,挑选单克隆,提取质粒,将所提取的质粒双酶切鉴定并测序。再将构建成功的pIRES2-DsRed2-Hath1质粒通过脂质体LipofectamineTM2000转染HEK293T细胞,观测其转染情况和目的基因的表达情况。结果成功地构建了真核表达载体pIRES2-DsRed2-Hath1,该质粒能有效地转染HEK293T细胞,目的基因能有效表达。结论pIRES2-DsRed2-Hath1的构建为Hath1基因转染致聋小鼠的耳蜗的实验奠定了基础。
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| 关 键 词： | 基因克隆 真核表达载体 脂质体 |
Constructing pIRES2-DsRed2-Hath1 and its expression in HEK293T |
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| CHEN Jie,GAO Xia,ZHU Min-sheng,ZHANG Wen-cheng,MA Xiao-feng,GU Xiang-fang. Constructing pIRES2-DsRed2-Hath1 and its expression in HEK293T[J]. China Journal of Modern Medicine, 2007, 17(18) |
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| Authors: | CHEN Jie GAO Xia ZHU Min-sheng ZHANG Wen-cheng MA Xiao-feng GU Xiang-fang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hath1 |
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