| 人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 庞小娟,赵晓琴,陈芳芳,彭薇,张弛,臧宇辉,罗冰,虞伟,秦浚川,李晓军. 人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定[J]. 临床检验杂志, 2010, 28(1): 59-62 |
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| 作者姓名： | 庞小娟 赵晓琴 陈芳芳 彭薇 张弛 臧宇辉 罗冰 虞伟 秦浚川 李晓军 |
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| 作者单位： | 南京师范大学生命科学学院;南京军区南京总医院全军临床检验医学研究所;南京大学医药生物技术国家重点实验室; |
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| 基金项目： | 江苏省科教兴卫医学重点人才基金课题(RC2007117);;南京军区医药卫生科研项目重点课题(07Z032) |
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| 摘 要： | 目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达。结果Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×1010PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达。结论成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达。
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| 关 键 词： | 细胞分化抑制因子3 重组腺病毒 滴度测定 表达 |
| 收稿时间： | 2009-11-16 |
| 修稿时间： | 2009-12-05 |
Preparation and identification of recombinant adenovirus carrying human inhibitors of differentiation 3 |
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| PANG Xiaojuan,ZHAO Xiaoqin,CHEN Fangfang,PENG Wei,ZHANG Chi,ZANG Yuhui,LUO Bing,YU Wei,QIN Junchuan and LI Xiaojun. Preparation and identification of recombinant adenovirus carrying human inhibitors of differentiation 3[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Science, 2010, 28(1): 59-62 |
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| Authors: | PANG Xiaojuan ZHAO Xiaoqin CHEN Fangfang PENG Wei ZHANG Chi ZANG Yuhui LUO Bing YU Wei QIN Junchuan LI Xiaojun |
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| Affiliation: | 1.College of Life Science/a>;Nanjing Normal University/a>;Nanjing 210046/a>;2.Institute of Clinical Laboratory Medicine/a>;PLA/a>;Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command/a>;Nanjing 210002/a>;3.State Key Laboratory of Pharmaceutical Biotechnology/a>;Nanjing University/a>;Nanjing 210093/a>;China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | inhibitors of differentiation 3 recombinant adenovirus titer determination expression |
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