表皮生长因子对人眼Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制

背景研究证实表皮生长因子（EGF）可促进鼠视网膜Müller细胞的增生和迁移，但EGF能否促进人眼Müller细胞的增生迁移尚未见报道。目的探讨人眼Müller细胞能否自身表达和分泌EGF及EGF对Müller细胞增生迁移的影响及其作用机制。方法同一代人永生株Müller细胞系MIO—M1细胞用高糖DMEM进行培养，利用MTT比色法观察不同质量浓度EGF作用24、48、72h，不同浓度CoCl2作用12h和24h，加入导致Müller细胞半数致死量的CoCl，浓度前2h加入不同质量浓度EGF的Müller细胞增生情况；Transwell小室观察正常及CoCl2缺氧条件下用不同质量浓度EGF作用24、48、72h后Müller细胞的迁移情况；采用ELISA法观察Müller细胞表达和分泌EGF的情况；通过Westernblot法检测体外不同条件培养下EGF对ERK1/2及Akt信号转导通路的作用。结果正常培养条件下，不同质量浓度的EGF作用后Mfiller细胞的吸光度（A570）值的总体比较差异有统计学意义（F=123．765，P=0．000），100mg／LEGF促Müller细胞增生作用最强，为对照组的1．6倍，10mg／LEGF促Müller细胞迁移的作用最强，为对照组的4．5倍。各EGF组Müller细胞的A570，值均明显高于对照组，差异有统计学意义（P〈O．01）。缺氧条件下培养，Müller细胞半数致死量的CoCl2浓度为600nmol／L，提前2h加入10～100阻g／LEGF后，EGF对抗缺氧所致Muller细胞的损伤作用最明显。700nmol／LCoCl2致Müller细胞损伤80％时其自身低分泌7．8ng／LEGF。10～100mg／LEGF作用Müller细胞促增生迁移作用信号最明显，600nmol／ LCoCl2作用Müller细胞24h后ERKl／2及Akt信号强度减弱，提前2h加入外源性EGF后，ERK1／2及Akt两条信号通路最明显。结论EGF能以剂量依赖的方式促进体外培养的Müller细胞增生及迁移。正常培养条件下的Müller细胞自身不表达，缺氧条件下Müller细胞自身可少量分泌EGF。EGF可能通过ERK1／2及Akt信号转导通路介导Müller细胞的增生和迁移，并对CoCl2损伤的Müller细胞发挥保护作用。