绿原酸致RBL-2H3细胞脱颗粒反应及机制研究

目的 研究绿原酸对大鼠嗜碱性白血病细胞 RBL-2H3 脱颗粒作用及可能机制。方法 将不同质量浓度(3.125、6.250、12.500、25.000、50.000、100.000、200.000 μg·mL-1)的绿原酸作用于 RBL-2H3 细胞,通过实时细胞分析(RTCA)系统检测绿原酸干预后引起的细胞指数(CI)值变化,以评价 RBL-2H3 细胞脱颗粒情况;利用甲苯胺蓝染色观察细胞形态变化;化学荧光法测定组胺释放率;底物显色法测定β-氨基己糖苷酶释放率、类胰蛋白酶释放量;网络药理学预测绿原酸诱导RBL-2H3 细胞脱颗粒的潜在机制,并应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对预测通路的主要靶点细胞外调节蛋白激酶(ERK1)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)mRNA水平进行检测。结果 绿原酸质量浓度 ≥ 6.25 μg·mL^-1时,可使RBL-2H3细胞的CI值在给药20min后呈现先快速上升后下降的趋势;绿原酸质量浓度 ≥ 12.5 μg·mL^-1时,RBL-2H3 细胞逐渐变圆甚至呈现多边形;与对照组比较,β-氨基己糖苷酶、组胺和类胰蛋白酶的释放量显著增加(P<0.05、0.01、0.001)。网络药理学预测发现,绿原酸致细胞脱颗粒作用可能与MAPK、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)等信号通路相关;qRT-PCR 结果证实,与对照组比较,绿原酸可显著增加 ERK1、p38MAPK mRNA表达(P<0.05、0.01),但对JNK mRNA表达影响不显著。结论 绿原酸可通过激活ERK1、p38 MAPK通路诱导 RBL-2H3 细胞发生脱颗粒,具有潜在的诱发类过敏反应作用。

Degranulation response and mechanism of chlorogenic acid on RBL-2H3 cells