siRNA干扰 BMI-1 基因对膀胱癌EJ细胞增殖的调控作用及其机制

目的: 对比观察膀胱癌EJ细胞及人膀胱移行上皮细胞中 BMI-1 基因及下游 p16^INK4a、p14^ARF 基因的mRNA及蛋白表达水平,探讨siRNA干扰 BMI-1 基因后对EJ细胞增殖的影响及其调控机制。方法: 细胞免疫荧光观察BMI-1、p16^INK4a和p14^ARF蛋白在EJ细胞中表达情况及定位。Real-time RT-PCR检测EJ细胞及膀胱正常移行上皮细胞中3种基因的表达水平,Western blotting检测蛋白水平。构建干扰 BMI-1 基因siRNA,通过脂质体转染导入EJ细胞中,设立空白对照和阴性干扰对照组,检测 BMI-1 及下游 p16、p14 基因表达水平及蛋白表达水平的变化;以CCK-8检测细胞生长观察siRNA干扰 BMI-1 表达对EJ细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞凋亡的改变。结果: BMI-1mRNA及蛋白水平在EJ细胞表达高于膀胱移行上皮细胞,而p16^INK4a和p14^ARFmRNA及蛋白在EJ细胞表达水平稍低于膀胱移行上皮细胞。siRNA干扰 BMI-1 后可以上调EJ细胞中其下游p16和p14 mRNA及蛋白水平,使EJ细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。结论: siRNA干扰 BMI-1 基因表达对EJ细胞的体外生长具有明显的抑制作用,其作用机制与上调其下游 p16^INK4a、p14^ARF 基因的表达有关。

Regulatory effect of siRNA interference targeting BMI-1 gene on proliferation of bladder cancer EJ cells

AIM: To investigate whether siRNA-mediated BMI-1 gene silencing inhibits the proliferation of EJ cells by detecting the expression of BMI-1,p16INK4a and p14ARF genes at mRNA and protein levels in bladder cancer EJ cells and normal bladder transitional epithelium cells.METHODS: The protein expression and localization of BMI-1,p16INK4a and p14ARF in EJ cells were determined by cellular immunofluorescence.An siRNA targeting BMI-1 gene was synthesized and transfected into bladder carcinoma EJ cells by liposomes...