构建可分解草酸的成人骨髓间充质干细胞系**

背景：高草酸尿是结石形成的危险因素之一，利用基因工程和干细胞技术构建具有高代谢草酸能力的细胞系，将成为防治草酸钙结石的有效手段。目的：将产甲酸草酸杆菌的草酸分解基因 Frc 和 Oxc 共转染至正常成人骨髓间充质干细胞，构建可分解草酸的成人骨髓间充质干细胞系，使之获得分解草酸的功能。方法：PCR 法扩增出 Frc 和 Oxc 基因的编码序列，构建真核表达载体 pLEGFP-N1-myc-Frc 和pBaBE-puro-flag-Oxc，将其共转染至正常成人骨髓间充质干细胞，以转染空载体及未进行转染的正常成人骨髓间充质干细胞作为对照。采用 Western blot 检测目的基因表达情况；离子色谱法测定转基因后细胞培养液中草酸浓度。结果与结论：酶切鉴定和测序结果显示实验成功扩增了 Frc 和 Oxc 基因，并构建了 pLEGFP-N1-myc-Frc 和pBaBE-puro-flag-Oxc 载体。将其转染至正常成人骨髓间充质干细胞后，Western blot 检测结果显示其可稳定表达目的蛋白 myc-甲酰辅酶 A 转移酶和 flag-草酰辅酶 A 脱羧酶；离子色谱仪检测结果显示，随着培养时间的延长，转染目的基因的人骨髓间充质干细胞培养液中草酸浓度逐渐下降。而转染空载体及未进行转染的正常成人骨髓间充质干细胞无目的蛋白表达，也无分解草酸能力。说明实验成功构建了可分解草酸的成人骨髓间充质干细胞系，该细胞系可稳定表达草酸分解蛋白 Frc 和 Oxc，并具有草酸分解能力。

Construction of oxalate-degrading adult bone marrow mesenchymal stem cell lines