人类髓核细胞分离培养方法的优化选择*

背景：关于人类髓核细胞的分离培养方法不一，所用消化酶组分及消化时间差异较大，如何提高人类髓核细胞获得效率的问题尚未解决。目的：优选人类髓核细胞获取的消化酶组分和消化方法。方法：髓核组织标本取自吉林大学中日联谊医院骨科成人椎间盘3例。无菌条件下取突出至椎管内的急性创伤后椎间盘组织，可见到外周白色的纤维环和中心胶冻样的髓核组织。按不同混合酶组分划分为2组，Ⅰ组成分为0.2%Ⅱ型胶原酶；Ⅱ组成分为先用0.25%胰酶消化30 min，再用0.2%Ⅱ型胶原酶。每组再按消化时间分为2，4 h，过夜3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位2 mL 并计数，采用含胎牛血清的 DMEM 培养液体外培养细胞。观察不同组分酶对分离所得髓核细胞数量、活性及增殖能力的影响，采用锥虫蓝染色计数细胞总数及活细胞比值，MTT 法测定髓核细胞生长曲线。结果与结论：采用2种不同酶组分进行消化，发现消化时间2，4 h 时，Ⅱ组消化细胞较Ⅰ组多，但差异无显著性意义(P >0.05)。孵育过夜时，Ⅰ组和Ⅱ组的存活细胞率较消化2，4 h 明显降低，差异有显著性意义(P <0.05)。在作用4 h 时，组织块消失，计数细胞数量最多。提示以Ⅱ型胶原酶为主要成分的Ⅰ组对分离髓核细胞有利，消化时间以4 h 为宜，该条件具有操作简单，效率较高，成本较低等优点，可以认为0.2%Ⅱ型胶原酶消化髓核组织块4 h 为获取髓核细胞的最佳条件。

Optimized method for isolating and culturing human nucleus pulposus cells