| 人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定 |
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| 引用本文： | 王水良,庄岳鹏,王志红,兰风华. 人甲胎蛋白基因启动子siRNA表达载体的构建及效应鉴定[J]. 肿瘤, 2007, 27(3): 190-193 |
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| 作者姓名： | 王水良 庄岳鹏 王志红 兰风华 |
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| 作者单位： | 南京军区福州总医院检验医学研究所分子医学研究中心,福州,350025 |
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| 基金项目： | 福建省青年科技人才创新基金 |
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| 摘 要： | 目的：探索基于人甲胎蛋白基因启动子构建的siRNA表达载体介导目的基因RNA干扰的可行性，为实现肝癌细胞靶向RNAi治疗作一初步研究。方法：PCR法扩增获得人甲胎蛋白基因启动子并插入pSilencer1．0-U6中以置换其U6启动子；依据hLRH-1基因RNAi靶位点设计出siRNA模板DNA，体外合成相应寡核苷酸片段后经退火形成短双链，再克隆构建成靶向人hLRH-1基因siRNA表达载体；脂质体转染法将上述重组质粒转入HepG2细胞中，实时定量PCR法初步分析所建系统在AFP表达细胞中触发靶基因hLRH-1的RNAi效应，以及hLRH-1调控下游靶基因的表达改变。结果：获得人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体pSiAFP。所建的RNAi载体系统可在表达AFP的HepG2细胞中有效诱导靶基因hLRH-1表达下调，抑制率约达85％；同时调控hLRH-1下游靶基因CyclinE 1与Oct4的表达相应下调。结论：人甲胎蛋白基因启动子驱动的siRNA表达载体可在表达AFP的HepG2细胞中有效介导靶基因的RNAi效应。
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| 关 键 词： | 肝肿瘤,实验性 甲胎蛋白类 RNA干扰 调控序列,核酸 HepG2细胞 |
| 文章编号： | 1000-7431（2007）03-0190-04 |
| 收稿时间： | 2006-10-20 |
| 修稿时间： | 2006-12-05 |
Construction of siRNA expression vector driven by promoter of human alpha-fetoprotein gene and the identification of its RNAi effect |
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| WANG Shui-liang,ZHUANG Yue-peng,WANG Zhi-hong,LAN Feng-hua. Construction of siRNA expression vector driven by promoter of human alpha-fetoprotein gene and the identification of its RNAi effect[J]. Tumor, 2007, 27(3): 190-193 |
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| Authors: | WANG Shui-liang ZHUANG Yue-peng WANG Zhi-hong LAN Feng-hua |
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| Affiliation: | Center for Molecular Medicine, Institute of Laboratory Medicine, Fuzhou General Hospital, Fuzhou 350025,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Liver neoplasms, experiment alpha-Fetoproteins RNA interference Regulatory sequence, nuclei acid HepG2 cells |
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