| 重组降钙素原的原核表达及在质控品中的应用研究 |
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| 引用本文： | 王小明,肖斌,张雷,卢艳华,李杉,周志伟,李林海.重组降钙素原的原核表达及在质控品中的应用研究[J].热带医学杂志,2022(9):1191-1195. |
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| 作者姓名： | 王小明 肖斌 张雷 卢艳华 李杉 周志伟 李林海 |
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| 作者单位： | 1. 华南理工大学生物科学与工程学院;2. 广州天宝颂原生物科技开发有限公司;3. 中国人民解放军南部战区军区总医院检验科 |
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| 基金项目： | 广州市民生科技重大攻关项目(201903010060)； |
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| 摘 要： | 目的 构建重组降钙素原(PCT)原核表达系统，探索超声裂解对重组PCT蛋白稳定性的影响，为PCT质控品的开发与应用提供参考。方法 通过基因工程方法构建PCT表达质粒，利用大肠杆菌原核表达系统经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组PCT蛋白，分析其在三种不同免疫检测系统(罗氏cobas、梅里埃Vidas及天宝颂原FIA-T-01)中的免疫反应性，比较不同超声裂解功率对重组PCT蛋白稳定性及提取产率的影响，以荧光免疫检测系统评估质控品瓶间均一性及在2～8℃、37℃条件下的保存稳定性。结果 成功构建了PCT-pET32a原核表达载体，重组PCT蛋白经IPTG诱导高效表达，分子量约35×103Mr；超声时长20 min(超声3 s、间断2 s和功率120 W)裂解时，对重组PCT蛋白的稳定性影响最小，产量较高。以此工艺制备的质控品在三种主流PCT免疫检测系统中均表现出良好的免疫反应性，瓶间均匀性差异无统计学意义(F<2.39)。质控品在2～8℃贮存15个月、37℃贮存7 d性能稳定。结论 超声裂解工艺会影响重组PCT蛋白的稳定性，制备的重组PCT蛋白...
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| 关 键 词： | 降钙素原 质控品 裂解工艺 均一性 稳定性 |
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