pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒的构建与蛋白表达

目的:通过基因重组方法构建pCMV-Myc-PIASxβ质粒，在真核细胞中高效表达重组蛋白并进行检测。方法:用SalⅠ和NotⅠ将PIASxβ片段从pGADT7载体中酶切后，利用DNA重组技术将其定向插入pCMV-Myc载体中。获得正确重组质粒后，瞬转CHO细胞系，用Western blotting检测Myc-PIASxβ重组融合蛋白表达。结果:经过酶切，片段回收，连接转化，获得重组质粒。重组pCMV-Myc-PIASxβ克隆通过酶切和测序鉴定其正确性。EcoRⅠ酶切鉴定，pCMV-Myc-PIASxβ为一条大小5 641 bp的条带；XbaⅠ酶切鉴定，pCMV-Myc-PIASXβ为2条大小分别为3 291和2 349 bp 的条带，符合预计大小。Western blotting检测证实，在相对分子质量68 000处（PIASxβ融合蛋白）有特异的蛋白表达条带，与重组质粒相符。结论：成功构建了pCMV-Myc-PIASxβ重组质粒，为深入研究PIAS家族的功能奠定良好的基础。