| 抗甲硝唑人源scFv抗体筛选与鉴定 |
| |
| 引用本文： | 马巍娜,刘雪林,宋宏彬,沈建良,黄友章,宫立众,向丹,臧丽梅.抗甲硝唑人源scFv抗体筛选与鉴定[J].现代检验医学杂志,2010,25(4):7-10. |
| |
| 作者姓名： | 马巍娜 刘雪林 宋宏彬 沈建良 黄友章 宫立众 向丹 臧丽梅 |
| |
| 作者单位： | 1. 中国人民解放军海军总医院血液科,北京,100037
2. 中国人民解放军军事医学科学院十所,北京,100039 |
| |
| 基金项目： | 国家863计划科学基金资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的 筛选甲硝唑人源单链可变区（scFv）抗体,为研究快速检测试剂盒奠定基础.方法 采用噬菌体表面展示技术,以甲硝唑作为抗原,固相包被于Nunc板,应用半合成的人源单链可变区抗体文库技术,从噬菌体单链可变区抗体库中经过3轮＂吸附-洗脱-扩增＂筛选过程,随机挑选抗甲硝唑的90个克隆,利用酶联免疫吸附法（ELISA）、交叉反应及竞争抑制实验,对其进行免疫学检测和鉴定,获得与甲硝唑结合活性较强的scFv阳性克隆,从噬菌体抗体阳性克隆中提取质粒,经酶切鉴定SfiⅠ/NotⅠ后,亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌XL1-Blue,提取质粒进行酶切鉴定分析.结果 经过筛选90个克隆中有16株克隆ELISA的490 nm波长吸光度（A490nm）值较高,将这些噬菌体上清与牛血清清蛋白（BSA）进行交叉反应,确定有4株交叉反应较弱,结合3次ELISA重复实验的A值及竞争抑制实验结果,最后确定1株阳性克隆.亚克隆到pCANTAB5E载体;转化大肠埃希菌感受态细胞XL1-Blue.结论 提取质粒酶切片段与目的相符,为下一步研究其特异性亲和力的研究创造了条件.
|
| 关 键 词： | 噬菌体表面展示技术 甲硝唑 人源单链可变区 |
Screening and Characterization of Human Phage Antibody to Metronidazole |
| |
| MA Wei-na,LIU Xue-lin,SONG Hong-bin,SHEN Jian-liang,HUANG You-zhang,GONG Li-zhong,XIANG Dan,ZANG Li-mei.Screening and Characterization of Human Phage Antibody to Metronidazole[J].Journal of Modern Laboratory Medicine,2010,25(4):7-10. |
| |
| Authors: | MA Wei-na LIU Xue-lin SONG Hong-bin SHEN Jian-liang HUANG You-zhang GONG Li-zhong XIANG Dan ZANG Li-mei |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
