Taqman MGB探针荧光定量PCR检测HBV DNA含量及YMDD变异的方法学评价

目的评价Taqman MGB探针荧光定量PCR技术检测血清乙型肝炎病毒DNA含量及YMDD变异的方法学特性。方法照美国临床和实验室标准协会(clinical and laboratory standards institute,CLSI)制定的评价方案,对该方法HBV DNA定量的线性范围、精密度、准确性作评价。以序列直接测定法作为诊断YMDD变异的金标准,对该方法YMDD变异检测的灵敏度、特异性和诊断符合率作评价。结果该方法HBV DNA定量在103~108copy/ml范围内呈线性,精密度好(<10%),准确度高(平均回收率为97.5%)。CT(FAM)≤35,Ct设定临界值为7时,当HBV YMDD变异>25%时能检测到变异存在;Ct设定临界值为UNDETECT时,当HBV YMDD变异>50%时能检测到变异存在。以直接测序方法为金标准,该方法YMDD变异检测的灵敏度97%,特异性100%,诊断符合率99.5%。结论该方法检测HBV DNA载量和YMDD变异可以在同一管中完成,特异性高,灵敏度相对较低,但具有快速、准确、经济实用等特点。

Evaluation of Taqman MGB probe fluorescence quantitative PCR detection of HBV DNA content and YMDD mutation