| 人源HepaRG肝细胞毒性与遗传毒性高通量筛选方法的初步建立 |
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| 引用本文： | 文海若,毛志慧,耿兴超,李波,王雪,黄芝瑛.人源HepaRG肝细胞毒性与遗传毒性高通量筛选方法的初步建立[J].现代药物与临床,2017,40(11):1550-1558. |
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| 作者姓名： | 文海若 毛志慧 耿兴超 李波 王雪 黄芝瑛 |
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| 作者单位： | 中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176;中山大学 药学院, 广州 510006,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176;中山大学 药学院, 广州 510006,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176;中山大学 药学院, 广州 510006,中国食品药品检定研究院国家药物安全评价监测中心, 药物非临床安全评价研究北京市重点实验室, 北京 100176,中山大学 药学院, 广州 510006 |
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| 基金项目： | 国家"重大新药创制"科技重大专项（2015ZX09501004-002）;中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金（2014C1） |
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| 摘 要： | 目的 利用正常人源肝细胞（HepaRG）和高内涵技术检测肝毒性标志物,并结合微核试验和单细胞凝胶电泳试验建立体外细胞毒性和遗传毒性的快速筛选平台。方法 选取适当的荧光探针Hoechst33342、DCFH-DA、Fluo4-AM、MitoTracker® Red CMX Ros联合高内涵技术研究不同大黄蒽醌类单体（AQs）对HepaRG细胞活性氧簇（ROS）、胞内Ca2+含量及线粒体膜完整性等肝毒性标志物的影响,并开展高内涵法胞质分裂阻断法微核试验和高通量彗星电泳试验,综合评价AQs致肝细胞毒性及染色体、DNA损伤情况。结果 与对照组比较,HepaRG细胞经25.0 μg/mL大黄素、12.5和25.0 μg/mL芦荟大黄素、50和25.0 μg/mL大黄酚处理24 h后,胞内ROS含量显著增多;12.5和25.0 μg/mL芦荟大黄素和50.0 μg/mL大黄酸可引起胞内Ca2+含量显著增多;大黄素25.0 μg/mL、芦荟大黄素25.0 μg/mL、大黄酚50.0和25.0 μg/mL、大黄酸50.0和25.0 μg/mL组导致线粒体明显损伤（P<0.05、0.01）。与对照组比较,25.0 μg/mL大黄素诱导微核率、尾DNA含量和彗星尾距（OTM）数值均显著升高（P<0.05、0.01）;50.0 μg/mL大黄酚给药72 h后微核率显著升高（P<0.01）。结论 AQs的研究结果与现有文献报道基本相符。本研究成功建立肝细胞毒性和遗传毒性的联合快速筛选模型,有助于药物研发早期的毒性筛选。
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| 关 键 词： | 大黄蒽醌类单体 HepaRG细胞 高通量筛选 肝细胞毒性 活性氧 线粒体损伤 遗传毒性 DNA断裂 染色体损伤 微核试验 单细胞凝胶电泳 大黄素 芦荟大黄素 大黄酚 大黄酸 |
| 收稿时间： | 2017/6/9 0:00:00 |
Preliminary validation of high throughput screening methods for hepatotocity and genotoxicity in humanized HepaRG cells |
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| WEN Hai-ruo,MAO Zhi-hui,GENG Xing-chao,LI Bo,WANG Xue and HUANG Zhi-ying.Preliminary validation of high throughput screening methods for hepatotocity and genotoxicity in humanized HepaRG cells[J].Drugs & Clinic,2017,40(11):1550-1558. |
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| Authors: | WEN Hai-ruo MAO Zhi-hui GENG Xing-chao LI Bo WANG Xue and HUANG Zhi-ying |
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| Institution: | National Center for Safety Evaluation of Drugs, National Institutes for Food and Drug Control, Key Laboratory of Beijing for Nonclinical Safety Evaluation Research of Drugs, Beijing 100176, China,National Center for Safety Evaluation of Drugs, National Institutes for Food and Drug Control, Key Laboratory of Beijing for Nonclinical Safety Evaluation Research of Drugs, Beijing 100176, China;School of Phamaceutical Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510006, China,National Center for Safety Evaluation of Drugs, National Institutes for Food and Drug Control, Key Laboratory of Beijing for Nonclinical Safety Evaluation Research of Drugs, Beijing 100176, China;School of Phamaceutical Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510006, China,National Center for Safety Evaluation of Drugs, National Institutes for Food and Drug Control, Key Laboratory of Beijing for Nonclinical Safety Evaluation Research of Drugs, Beijing 100176, China;School of Phamaceutical Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510006, China,National Center for Safety Evaluation of Drugs, National Institutes for Food and Drug Control, Key Laboratory of Beijing for Nonclinical Safety Evaluation Research of Drugs, Beijing 100176, China and School of Phamaceutical Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510006, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rhubarb anthraquinones HepaRG cell high throughput screening hepatotoxicity reactive oxygen species mitochondrial damage genotoxicity DNA breakage chromosome damage micronucleus assay single cell gel electrophoresis assay emodin aloe-emodin chrysophanol rhein |
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