抑制细胞周期素依赖性蛋白激酶5对小鼠足细胞凋亡的影响

目的探讨细胞周期素依赖性蛋白激酶5(Cdk5)在高糖刺激体外培养小鼠足细胞中的表达及抑制Cdk5表达对高糖诱导足细胞凋亡的影响。方法 (1)体外培养条件性小鼠足细胞,分为正常糖组、甘露醇组、高糖组,高糖组按不同刺激时间分为0、6、12、24、48h5组,应用蛋白质印迹(Western blot)法检测足细胞中Cdk5蛋白表达水平。(2)应用Cdk5miRNA干扰质粒抑制足细胞中Cdk5基因的表达水平。分别设立:NG组(正常糖);HG组(高糖);HG+S组(高糖+Scrambled阴性质粒);HG+C组(高糖+Cdk5miRNA质粒)。以上各组细胞培养48h后,应用流式细胞术和末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL)法检测足细胞凋亡水平,Western blot法检测凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和分裂型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)的蛋白表达水平。结果与正常糖组相比,高糖刺激后,足细胞中Cdk5的蛋白表达水平明显增加(P<0.05)。Cdk5miRNA干扰质粒能显著抑制足细胞中Cdk5的表达水平。与HG组和HG+S组相比,HG+C组足细胞凋亡率显著降低(P<0.05),凋亡相关蛋白cleaved caspase-3蛋白表达水平和Bax/Bcl-2蛋白表达比率也有明显降低(P<0.05)。结论高糖刺激可以增加足细胞中Cdk5蛋白的表达水平;抑制Cdk5表达可以降低高糖刺激诱导的足细胞凋亡。