| 摘 要： | 目的构建P53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族的抑制成员iASPP的真核表达载体,并将其通过脂质体转染到结肠癌细胞株SW480及Lovo中,观察转染前后iASPP表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法将解放军第十六医院检验科经测序鉴定的pMD19-T-iASPP质粒亚克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP,测序鉴定后用脂质体将重组质粒转染至结肠癌细胞株SW480及Lovo中,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测iASPP的表达以及用流式细胞仪检测细胞凋亡的变化情况。结果重组表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP,经酶切测序与GenBank上记录的人iASPP cDNA序列(gi 60457962)完全一致。经pcDNA3.1(+)-iASPP质粒转染的结肠癌细胞株SW480及Lovo的iASPP mRNA表达增高,细胞凋亡率下降。结论成功构建了重组表达质粒pcDNA3.1(+)-iASPP,并成功在结肠癌细胞株SW480及Lovo中获得了表达,细胞株的凋亡率下降,提示抑制iASPP高表达有可能成为恢复P53抑癌功能的新策略。
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