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| 钙整合素结合蛋白CIB的原核表达及多克隆抗体的制备与亚细胞定位 | |
| 引用本文： | 石洁,惠玲,张煦,王晓辉,杨金升,吕同德,赵治华,哈小琴.钙整合素结合蛋白CIB的原核表达及多克隆抗体的制备与亚细胞定位[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(1). |
| 作者姓名： | 石洁 惠玲 张煦 王晓辉 杨金升 吕同德 赵治华 哈小琴 |
| 作者单位： | 1. 兰州大学基础医学院病理解剖学研究所,甘肃,兰州,730000;兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃,兰州,730050 2. 兰州军区兰州总医院医学实验中心,甘肃,兰州,730050 3. 兰州大学基础医学院病理解剖学研究所,甘肃,兰州,730000 4. 兰州军区兰州总医院神经内科,甘肃,兰州,730050 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，中国博士后科学基金 |
| 摘 要： | 目的:构建钙整合素结合蛋白(calcium-and intesrin-binding protein,CIB)的原核表达载体,制备小鼠抗人CIB的多克隆抗体并探讨其亚细胞定位.方法:采用RT-PCR方法从人脑组织扩增CIB的cDNA片段,利用DNA重组技术构建原核表达载体pET32a-CIB,转入BL21(DE3)中,以IPTG诱导BL21(DE3)表达CIB融合蛋白,SDS-PAGE鉴定融合蛋白CIB的表达.用含CIB融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒为抗原免疫小鼠制备抗血清,抗血清分别经Protein G、抗原亲和层析后用Western blot及免疫组化方法进行鉴定.结果:通过重组表达获得CIB抗原蛋白,免疫小鼠并纯化抗血清得到特异性的抗CIB抗体,该抗体能检测细胞内源性CIB蛋白的表达;同时免疫组化结果显示:CIB在SHG44、Hhu7细胞株中主要定位于细胞质.结论:成功克隆CIB基因并制备了特异性的小鼠抗人的CIB多克隆抗体,对进一步研究CIB的功能奠定了基础. |
| 关 键 词： | 基因重组 融合表达 多克隆抗体 亚细胞定位 |
Prokaryotic expression, polyclonal antibody preparation and subcellular localization of CIB |
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| SHI Jie,HUI Ling,ZHANG Xu,WANG Xiao-hui,YANG Jin-sheng,LU Tong-de,ZHAO Zhi-hua,HA Xiao-qin.Prokaryotic expression, polyclonal antibody preparation and subcellular localization of CIB[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2009,25(1). | |
| Authors: | SHI Jie HUI Ling ZHANG Xu WANG Xiao-hui YANG Jin-sheng LU Tong-de ZHAO Zhi-hua HA Xiao-qin |
| Abstract: | |
| Keywords: | CIB |
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